目的利用siRNA對家蠅擬除蟲菊酯抗性基因cyp6d1的表達(dá)進(jìn)行干擾,并對基因沉默效果進(jìn)行評價。方法人工合成家蠅cyp6d1基因的siRNA,編號為C474、C1226、C1446;采用微量注射方式將其導(dǎo)入實驗室篩選出的cyp6d1基因高表達(dá)家蠅品系個體中;采用熒光染料PCR法對RNA干擾處理組和對照組家蠅體內(nèi)mRNA的表達(dá)量進(jìn)行定量測定,觀察不同處理組cyp6d1基因的沉默效應(yīng)。結(jié)果微量注射導(dǎo)入C474、C1226、C1446和陰性對照的家蠅cyp6d1基因mRNA表達(dá)量組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=14.948,P=0.000),組內(nèi)比較顯示各處理組與陰性對照組mRNA的表達(dá)量差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。注射C474、C1226、C1466的處理組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(F=2.615,P=0.101)。相對于陰性對照,注射了C474、C1226、C1466的處理組mRNA抑制率分別為63.74%、72.28%和65.99%。結(jié)論采用微量注射方式將人工合成的siRNA C474、C1226、C1446導(dǎo)入家蠅體內(nèi),可以在mRNA水平上對其cyp6d1基因的表達(dá)實現(xiàn)有效沉默。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試劑
    1.2 儀器
    1.3 試蟲
    1.4 cyp6d1基因干擾
        1.4.1 siRNA的設(shè)計與合成
        1.4.2 干擾RNA的導(dǎo)入
        1.4.3 RNA干擾效果評價
    1.5 統(tǒng)計學(xué)處理
2 結(jié)果
    2.1 siRNA導(dǎo)入
    2.2 cyp6d1基因沉默效果評價
3 討論



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