背景與目的:病毒是自然界最豐富的物種之一,很多病毒嚴(yán)重威脅人類健康。近年來,新發(fā)突發(fā)病毒性傳染病多次發(fā)生,鑒于其高度的不可預(yù)測性、突發(fā)性、病死率高的特點(diǎn),極易引起社會群體性恐慌。基于第二代高通量測序的病毒宏基因組學(xué)技術(shù)直接對環(huán)境中所有的病毒核酸序列進(jìn)行檢測,為調(diào)查已知和未知病毒提供了高效工具,成為發(fā)現(xiàn)新病毒的有效手段。蝙蝠分布范圍廣泛,是許多病毒的自然宿主,能攜帶包括多種人獸共患病毒在內(nèi)的170多種病毒。蝙蝠可以通過中間宿主動物、氣溶膠或抓咬傷等方式將病毒傳播給人類。我國云南省西南邊境與東南亞國家接壤,戰(zhàn)略意義突出,是多種病毒性疾病的疫源地,研究發(fā)現(xiàn)該地區(qū)蝙蝠攜帶有多種人獸共患病毒。本研究旨在調(diào)查云南普洱地區(qū)蝙蝠攜帶病毒的多樣性并發(fā)現(xiàn)新病毒,對防止野生動物源性病毒,特別是蝙蝠源性病毒傳播給人類提供指導(dǎo)意義。方法:在不影響蝙蝠種群延續(xù)的情況下,本研究于2016年7⁹月在云南普洱各地隨機(jī)收集84份外表健康的蝙蝠樣品,通過PCR方法鑒定蝙蝠品種。利用本實(shí)驗(yàn)室建立好的高通量測序樣品前處理方法對蝙蝠組織樣品處理并進(jìn)行Hiseq高通量測序;利用生物信息分析平臺對測序后的大量數(shù)...

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
第一部分 蝙蝠病毒宏基因組學(xué)研究
    材料與方法
        1 主要儀器和試劑
        2 生物信息軟件
        3 蝙蝠樣品采集
        4 蝙蝠種類鑒定及解剖
        5 高通量測序前組織樣品處理
        6 IlluminaHiseq測序
        7 測序后生物信息分析
    結(jié)果
        1 蝙蝠種類鑒定結(jié)果
        2 測序樣品質(zhì)量鑒定結(jié)果
        3 病毒宏基因組分析結(jié)果
    討論
第二部分 蝙蝠新病毒的鑒定
    材料與方法
        1 實(shí)驗(yàn)儀器、主要試劑和耗材
        2 樣品、細(xì)胞系和實(shí)驗(yàn)動物
        3 生物信息軟件
        4 特異性引物設(shè)計(jì)
        5 病毒核酸提取
        6 病毒RNA反轉(zhuǎn)錄
        7 病毒流行病學(xué)篩查
        8 病毒基因組擴(kuò)增
        9 制備DNA分子單克隆
        10 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        11 DPRV致病性實(shí)驗(yàn)
        12 構(gòu)建病毒進(jìn)化樹
        13 非同義突變替換率/同義突變替換率(dN/dS)比率分析
    結(jié)果
        1 新型漢坦病毒DodeHV
        2 新型彈狀病毒DPRV
    討論
研究結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    綜述參考文獻(xiàn)
倫理證明
攻讀學(xué)位期間的研究成果
致謝



本文編號：3771362