發(fā)布時(shí)間：2022-12-18 08:34

　　轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（transforming growth factorβ,TGF-β1）通路是介導(dǎo)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）發(fā)生的最重要信號(hào)通路之一,廣泛參與了胚胎發(fā)育、腫瘤轉(zhuǎn)移和纖維化等生理或病理過(guò)程。Toll樣受體4（Toll like receptor 4,TLR4）是最早發(fā)現(xiàn)的TLRs家族成員,除了對(duì)機(jī)體天然和獲得性免疫反應(yīng)起到調(diào)控作用外,在腫瘤轉(zhuǎn)移和纖維化過(guò)程中也發(fā)揮了重要作用。然而,TLR4信號(hào)通路對(duì)TGF-β介導(dǎo)的EMT是否具有調(diào)控作用及可能的分子機(jī)制尚未完全明確。在本研究中,TGF-β1可下調(diào)人呼吸道上皮細(xì)胞系A(chǔ)549細(xì)胞中上皮標(biāo)志物E-cadherin的表達(dá),上調(diào)間質(zhì)標(biāo)志物N-cadherin、Vimentin的表達(dá),且誘導(dǎo)細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞形態(tài)轉(zhuǎn)變。而給予TLR4激動(dòng)劑LPS刺激后,TGF-β1誘導(dǎo)A549細(xì)胞EMT的作用明顯減弱,提示TLR4激活可抑制TGF-β1介導(dǎo)的EMT。通過(guò)深度測(cè)序和q RT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn),LPS刺激可顯著上調(diào)A549細(xì)胞中mi R-181b的表達(dá)。染色質(zhì)免疫沉淀（Chroma... 

【文章頁(yè)數(shù)】：51 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第1章 緒論
第2章 綜述
    2.1 miRNA簡(jiǎn)介
        2.1.1 miRNA的發(fā)現(xiàn)
        2.1.2 miRNA的生物學(xué)特性
        2.1.3 miRNA的生物合成及作用機(jī)制
    2.2 miRNA在IPF中的表達(dá)調(diào)控
        2.2.1 let-7d與IPF
        2.2.2 miR-21與IPF
        2.2.3 miR-200與IPF
        2.2.4 miR-155與IPF
        2.2.5 miR-29與IPF
    2.3 miRNA與IPF的治療
第3章 資料和方法
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 主要實(shí)驗(yàn)器材（見(jiàn)表 3.1）
        3.1.2 主要試劑（見(jiàn)表 3.2）
        3.1.3 細(xì)胞系
    3.2 實(shí)驗(yàn)方案
        3.2.1 研究LPS刺激對(duì)TGFβ1 誘導(dǎo)的EMT的影響
        3.2.2 與TLR4激活相關(guān)的miRNAs表達(dá)譜
        3.2.3 預(yù)測(cè)并明確TLR4上調(diào)miR-181b的轉(zhuǎn)錄因子
        3.2.4 過(guò)表達(dá)miR-181b對(duì)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）的影響
        3.2.5 預(yù)測(cè)并明確miR-181b的作用靶點(diǎn)
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)及傳代
        3.3.2 熒光報(bào)告基因檢測(cè)（luciferase assay）
        3.3.3 染色質(zhì)免疫沉淀（Chromatin Immunoprecipitation，ChIP） 實(shí)驗(yàn)
        3.3.4 miR-181b轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞
        3.3.5 Trizol法提取總RNA及RNA完整性檢測(cè)
        3.3.6 qRT-PCR檢測(cè)miRNA和mRNA表達(dá)
        3.3.7 Western Blotting檢測(cè)
        3.3.8 細(xì)胞免疫熒光染色
        3.3.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第4章 結(jié)果
    4.1 LPS刺激可以減輕TGFβ 1誘導(dǎo)的A549細(xì)胞的EMT
    4.2 LPS刺激激活TLR4后引起A549細(xì)胞內(nèi)miRNAs變化
    4.3 qRT-PCR驗(yàn)證TLR4激活后miR-181b表達(dá)上調(diào)
    4.4 AP1為T(mén)LR4上調(diào)miR-181b的轉(zhuǎn)錄因子
    4.5 過(guò)表達(dá)miR-181b可以減輕TGF-β 誘導(dǎo)的EMT
    4.6 TGFBR1是miR-181b的下游作用靶點(diǎn)
第5章 討論
第6章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介及在學(xué)期間所取得的科研成果
致謝



本文編號(hào)：3721736