旨為以原核表達系統(tǒng)表達、純化新型H7N9禽流感病毒（安徽株）NA蛋白胞外區(qū)片段并制備該蛋白的多克隆抗體。對新型H7N9禽流感病毒神經(jīng)氨酸酶（Neuraminidase,NA）蛋白胞外區(qū)片段進行生物信息學分析,基于大腸桿菌密碼子偏愛性進行密碼子優(yōu)化并合成該蛋白編碼基因。將構建的重組質(zhì)粒pET28b-tN9（Truncated N9）轉化至E. coli BL21（DE3）、E. coli Rosetta和E. coli Arctic Express（DE3）,進行誘導表達,并進行SDS-PAGE鑒定。選取E. coli BL21（DE3）重組菌進行放大培養(yǎng)、IPTG誘導并對誘導產(chǎn)物進行鎳柱純化、SDS-PAGE分析和質(zhì)譜鑒定。將純化的重組蛋白免疫新西蘭大白兔,制備多克隆抗體,以Western blotting和間接ELISA法檢測抗體特異性及效價。成功表達并純化目標蛋白,Western blotting顯示制備的多克隆抗體能特異性識別重組蛋白和新型H7N9禽流感病毒（上海株）,間接ELISA方法檢測制備的多克隆抗體,效價為1∶256 000。利用原核表達系統(tǒng)高效表達并純化了tN9蛋白,制... 

【文章頁數(shù)】：9 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 新型H7N9禽流感病毒NA蛋白胞外區(qū)片段的生物學信息分析
        1.2.2目標基因表達載體的構建
        1.2.3目的蛋白的誘導表達、親和純化與質(zhì)譜鑒定
        1.2.4 動物免疫與多克隆抗體制備
        1.2.5 Western blotting法鑒定多抗特異性
        1.2.6 間接ELISA法測定多克隆抗體的效價
2 結果
    2.1 NA蛋白胞外區(qū)片段生物信息學分析結果
    2.2 pET28b-tN9重組表達載體構建
    2.3 目的蛋白的誘導表達
    2.4 目的蛋白親和純化與質(zhì)譜鑒定
    2.5 Western blotting法鑒定多抗特異性
    2.6 多克隆抗體的效價檢測
3 討論
4 結論


【參考文獻】：
期刊論文
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