發(fā)布時間：2017-05-12 15:14

  本文關鍵詞：雙基因NGF-IRES-BMP2真核質粒轉染大鼠BMSCs誘導成骨的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的運用基因工程的手段將雙基因真核質粒載體pCDNA3.1-NGF-IRES-BMP2轉染入大鼠BMSCs中,研究其誘導成骨后目的蛋白的表達情況方法取三月齡SD大鼠,頸椎脫臼處死后,通過全骨髓培養(yǎng)法分離培養(yǎng)大鼠BMSCs并穩(wěn)定傳代。倒置相差顯微鏡下觀察細胞生長形態(tài),運用流式細胞儀檢測大鼠BMSCs表面標志物CD31、CD90。取第三代大鼠BMSCs,分為五組,單基因pCDNA3.1-NGF轉染組(A組),單基因pCDNA3.1-BMP2轉染組(B組),雙基因pCDNA3.1-NGF-IRES-BMP2轉染組(C組),空質粒組(D組),陰性對照組(E組)。運用Lipofectamine2000介導將各組基因轉染入大鼠BMSCs。western-blot檢測目的基因蛋白表達情況,并用BioRad凝膠圖像分析系統(tǒng)測定各組灰度值。免疫組織化學染色檢測I型膠原蛋白表達含量。茜蘇紅染色測定各組BMSCs鈣結節(jié)并計數(shù)。數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。結果顯微鏡觀察BMSCs成功分離培養(yǎng)并穩(wěn)定傳代;流式細胞儀測定BMSCs表面標志物,CD90表達陽性,CD31表達陰性;各組基因轉染BMSCs后,western-blot、I型膠原免疫組化染色、茜蘇紅染色鈣結節(jié)及統(tǒng)計學分析均提示雙基因轉染組的目的蛋白表達量、I型膠原蛋白表達量、鈣結節(jié)形成數(shù)目均高于單基因轉染組、空質粒組以及陰性對照組。統(tǒng)計學分析結果p0.05,有差異。結論轉染雙基因pCDNA3.1-NGF-IRES-BMP2組BMSCs可同時表達兩種目的蛋白,并能誘導BMSCs向成骨細胞分化,且兩者具有協(xié)同成骨作用。
【關鍵詞】：BMSCs 轉染 NGF BMP2 誘導成骨
【學位授予單位】：桂林醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R3416
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• ABSTRACT5-8
• 英漢縮略詞對照表8-9
• 前言9-10
• 1 材料與方法10-20
• 1.1 實驗試劑與儀器10-11
• 1.2 主要實驗試劑11-13
• 1.3 實驗方法13-20
• 2 結果20-25
• 2.1 大鼠BMSCs形態(tài)學觀察20-21
• 2.2 大鼠BMSCs流式細胞鑒定21-22
• 2.3 western blot檢測NGF與BMP2目的蛋白的表達22-23
• 2.4 免疫組織化學染色檢測I型膠原蛋白的表達23-24
• 2.5 轉染后各組大鼠BMSCs培養(yǎng)14天后進行茜蘇紅染色并鈣結節(jié)計數(shù)24-25
• 3 討論25-30
• 4 結論30-31
• 5 參考文獻31-35
• 綜述35-51
• 參考文獻45-51
• 攻讀學位期間發(fā)表的學術論文目錄51-52
• 致謝52-53

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中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 陳寧;雙基因NGF-IRES-BMP2真核質粒轉染大鼠BMSCs誘導成骨的實驗研究[D];桂林醫(yī)學院;2015年

  本文關鍵詞：雙基因NGF-IRES-BMP2真核質粒轉染大鼠BMSCs誘導成骨的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：360129