背景許多促血管生成因子、血管生成因子和抗血管生成因子參與了糖尿病視網(wǎng)膜病變（Diabetic retinopathy,DR）的發(fā)病和進(jìn)展。結(jié)締組織生長(zhǎng)因子（connective tissue growth factor,CTGF）作為一種細(xì)胞基質(zhì)調(diào)節(jié)因子,在細(xì)胞的增殖、黏附、遷移以及血管生成、炎癥反應(yīng)和組織重構(gòu)等生理、病理過(guò)程中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。近年來(lái),CTGF與糖尿病及其并發(fā)癥的關(guān)系逐漸受到重視,但CTGF在DR中的作用和機(jī)制尚未完全闡明。目的克隆人CTGF基因cDNA,構(gòu)建重組表達(dá)載體pCTGF并轉(zhuǎn)染人胚腎293（HEK293）細(xì)胞,檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞中重組CTGF基因和蛋白的表達(dá)及對(duì)細(xì)胞增殖的影響,為制備CTGF抗體、進(jìn)行CTGF表達(dá)調(diào)控和功能研究奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法根據(jù)GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中人CTGF的基因序列,設(shè)計(jì)特異性引物,以人胚肺成纖維HFL-I細(xì)胞cDNA為模板,通過(guò)PCR反應(yīng)擴(kuò)增CTGF基因并進(jìn)行測(cè)序驗(yàn)證;將序列驗(yàn)證正確的CTGF cDNA基因克隆到真核表達(dá)載體pEGFP,將通過(guò)雙酶切鑒定正確的表達(dá)載體命名為p-CTGF并轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞,MTT法檢測(cè)表達(dá)載體對(duì)HEK2... 

【文章來(lái)源】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院河南省

【文章頁(yè)數(shù)】：65 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

真核表達(dá)載體pEGFP的質(zhì)粒圖譜示意圖

圖 2 真核表達(dá)載體 pCTGF 的質(zhì)粒構(gòu)建過(guò)程養(yǎng)及轉(zhuǎn)染復(fù)蘇線滅菌超凈工作臺(tái)及細(xì)胞間 30 min，并將完全培養(yǎng)基 DMEM期凍存細(xì)胞投入 370C 水浴鍋中，不斷晃動(dòng)，使之快速融粒時(shí)，酒精消毒后轉(zhuǎn)入超凈工作臺(tái)中；胞懸液轉(zhuǎn)移至 10 mL 的離心管中，加入 3 倍體積的完全 DM平離心 5 min；離心一次，調(diào)整合適細(xì)胞密度，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)，370C、5取細(xì)胞前，做好防護(hù)措施以防液氮濺落凍傷；快，取完細(xì)胞及時(shí)蓋好液氮罐，防止液氮過(guò)多揮發(fā)；

提取的細(xì)胞總RNA電泳圖

【參考文獻(xiàn)】：
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