發(fā)布時間：2017-05-11 02:15

  本文關鍵詞：SPAG6相互作用蛋白的酵母雙雜交篩選，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：構建重組SPAG6-PGBKT7質粒，用Yeast-2-Hybriy實驗來篩選出與SPAG6有相互作用的蛋白。 方法：1.在“PubMed”數據庫，尋找小鼠SPAG6全長堿基序列，分析SPAG6的活性區(qū)域（CDS區(qū)）；2.以小鼠睪丸的cDNA為模板，通過PCR技術擴增SPAG6序列；3.TA克��；4.構建SPAG6/PGBKT7重組質粒；5.將SPAG6/PGBKT7質粒轉入AH109細胞以SPAG6/PGBKT7為餌，使其與小鼠cDNA文庫，進行酵母雙雜交；6.提取酵母質粒；7.酵母質粒轉化；8.測序后分析。 結果：構建重組的SPAG6/PGBKT7質粒通過鑒定，結果正確；酵母雙雜交實驗，初步篩選出數個與SPAG6可能發(fā)生相互作用的蛋白。 結論：有許多蛋白與SPAG6有著相互作用。為進一步研究與SPAG6發(fā)生相互作用的蛋白提供依據。
【關鍵詞】：SPAG6 酵母雙雜交 相互作用蛋白篩選
【學位授予單位】：武漢科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：Q78;R3416
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-6
• 目錄6-8
• 前言8-10
• 1 材料與方法10-26
• 1.1 實驗試劑10-11
• 1.2 實驗儀器11-12
• 1.3 主要溶液的配制12-13
• 1.4 引物設計13-15
• 1.6 TA 克隆15-18
• 1.6.1 PCR 產物純化（膠回收法）15-16
• 1.6.2 克隆16
• 1.6.3 轉化16-17
• 1.6.4 篩選17
• 1.6.5 質粒提取17-18
• 1.6.6 酶切鑒定18
• 1.6.7 測序鑒定18
• 1.7 質粒重組18-21
• 1.7.1 酶切重組質粒及載體18-19
• 1.7.2 目的片段與載體重組連接19
• 1.7.3 連接產物轉化19-20
• 1.7.4 篩選20
• 1.7.5 重組質粒 SPAG6/PGBKT7 提取20-21
• 1.7.6 Spag6/PBGKT7 重組質粒的酶切鑒定21
• 1.8 Yeast-2-Hybriy 實驗21-24
• 1.8.1 酵母感受態(tài)細胞的制備21-22
• 1.8.2 酵母感受態(tài)細胞質粒 DNA 轉化22-23
• 1.8.3 酵母雙雜交23-24
• 1.9 酵母質粒篩選24
• 1.10 酵母質粒提取24-25
• 1.11 酵母質粒的鑒定25-26
• 2 結果26-35
• 2.1 小鼠的 SPAG6 堿基序列26-27
• 2.2 小鼠 SPAG6 的 PCR 結果27-28
• 2.3 TA 克隆連接產物酶切鑒定結果28-29
• 2.4 SPAG6 質粒測序結果29-31
• 2.5 克隆質粒 SPAG6 及載體質粒 PGBKT7 酶切結果31-32
• 2.6 SPAG6/PGBKT7 重組質粒酶切結果32-33
• 2.7 酵母質粒測序圖部分結果截圖33-34
• 2.8 酵母質粒測序分析后部分結果34-35
• 3 討論35-38
• 4 結論與展望38-39
• 參考文獻39-45
• 致謝45-46
• 綜述46-54
• 參考文獻51-54
• 附錄 1 攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文54-55
• 附錄 2 攻讀碩士學位期間參加的科研項目55-56
• 附錄 3 質粒及載體質粒圖譜56-58

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前7條

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  本文關鍵詞：SPAG6相互作用蛋白的酵母雙雜交篩選，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：356047