本文關(guān)鍵詞：星形膠質(zhì)細胞異質(zhì)性對其神經(jīng)元轉(zhuǎn)分化的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：星形膠質(zhì)細胞是哺乳動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)內(nèi)含量最豐富的細胞類型,廣泛參與各種中樞神經(jīng)生理及病理過程,如調(diào)節(jié)腦血流量、協(xié)助神經(jīng)突觸傳遞、參與構(gòu)成血腦屏障,通過縫隙連接結(jié)構(gòu),釋放和攝取多種信號物質(zhì)等,并且在病理條件刺激下星形膠質(zhì)細胞通過自身活化及增殖包裹和局限病灶區(qū)域,阻止病灶的進一步蔓延,對中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病損傷的修復起到重要作用。星形膠質(zhì)細胞在發(fā)現(xiàn)之初被認為是一類同質(zhì)性的細胞,僅僅通過形態(tài)上的差異將其區(qū)分為纖維型星形膠質(zhì)細胞和原漿型星形膠質(zhì)細胞。而隨著對星形膠質(zhì)細胞研究的不斷深入,目前普遍認為星形膠質(zhì)細胞在發(fā)育起源、基因表達、生物功能等方面都存在明顯的細胞異質(zhì)性,同時在不同的病理條件刺激下星形膠質(zhì)細胞也展現(xiàn)出不同的活化應(yīng)激反應(yīng),在多種疾病進程中扮演著異質(zhì)性的角色。由于神經(jīng)元具有無法再生和增殖的特性,而病灶區(qū)周圍星形膠質(zhì)細胞的過度活化也不利于神經(jīng)軸索的再生和連接,這些都成為治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病和損傷的主要障礙。近年來,隨著基因重編程技術(shù)和再生醫(yī)學的發(fā)展,將星形膠質(zhì)細胞,特別是過度活化的反應(yīng)性星形膠質(zhì)細胞直接轉(zhuǎn)分化為神經(jīng)元逐漸成為治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病或損傷的一種新策略。目前在體外和體內(nèi)實驗中人們已經(jīng)利用多種轉(zhuǎn)錄因子及小分子化合物成功誘導星形膠質(zhì)細胞直接轉(zhuǎn)分化為不同類型的成熟神經(jīng)元。然而,在哺乳動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi),由星形膠質(zhì)細胞誘導轉(zhuǎn)分化為神經(jīng)元的效率仍然比較低,且大腦、脊髓等不同部位的星形膠質(zhì)細胞轉(zhuǎn)分化為神經(jīng)元的效率也存在明顯差異。究其原因,除了星形膠質(zhì)細胞所處不同外在微環(huán)境的影響之外,與星形膠質(zhì)細胞本身的內(nèi)在異質(zhì)性是否有關(guān),目前還不清楚。在本研究中,我們在體外培養(yǎng)新生或成年小鼠皮層、小腦和脊髓等不同部位來源的星形膠質(zhì)細胞,并用轉(zhuǎn)錄分子NGN2或ASCL1通過基因重編程誘導轉(zhuǎn)分化為神經(jīng)元。結(jié)果發(fā)現(xiàn),不同來源的星形膠質(zhì)細胞在體外直接誘導轉(zhuǎn)分化為神經(jīng)元的效率存在顯著差異,而且這種差異的產(chǎn)生與所用不同轉(zhuǎn)錄因子沒有關(guān)系。通過對胚胎發(fā)育過程中與神經(jīng)元特化或基因重編程過程中與神經(jīng)元轉(zhuǎn)分化密切相關(guān)的一系列關(guān)鍵分子進行分析,我們發(fā)現(xiàn),Notch1通路信號分子在不同來源星形膠質(zhì)細胞內(nèi)的表達情況與其轉(zhuǎn)分化為神經(jīng)元的過程密切相關(guān)。我們進一步利用γ-分泌酶抑制劑DAPT或慢病毒RNA干擾阻斷Notch1信號通路,結(jié)果顯示與對照組相比,Notch1信號通路阻斷組的星形膠質(zhì)細胞向神經(jīng)元轉(zhuǎn)分化的效率明顯提高。上述研究結(jié)果表明,星形膠質(zhì)細胞轉(zhuǎn)分化為神經(jīng)元的效率受其細胞異質(zhì)性影響,該作用是由星形膠質(zhì)細胞內(nèi)Notch1信號通路所介導。這些研究有助于我們在未來更好地利用基因重編程技術(shù)將星形膠質(zhì)細胞誘導轉(zhuǎn)分化為神經(jīng)元,從而促進其在中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病或損傷治療中的應(yīng)用。
【關(guān)鍵詞】：星形膠質(zhì)細胞 細胞異質(zhì)性 基因重編程 細胞轉(zhuǎn)分化 神經(jīng)元 Notch1信號通路
【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R338
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 縮寫詞匯10-12
• 前言12-15
• 材料與方法15-21
• 一、星形膠質(zhì)細胞的原代培養(yǎng)15-16
• 二、NGN2或ASCL1質(zhì)粒構(gòu)建和慢病毒包裝16
• 三、星形膠質(zhì)細胞向神經(jīng)元直接轉(zhuǎn)分化16
• 四、Notch1通路抑制試驗16-17
• 五、免疫熒光染色17-18
• 六、Brd U標記的細胞增殖試驗18-19
• 七、RNA抽提和實時熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)19
• 八、蛋白印跡試驗19
• 九、計數(shù)與統(tǒng)計分析19-21
• 實驗結(jié)果21-42
• 一、小鼠星形膠質(zhì)細胞的體外培養(yǎng)與鑒定21-25
• 二、星形膠質(zhì)細胞在基因表達及增殖能力方面具有異質(zhì)性25-27
• 三、不同來源星形膠質(zhì)細胞直接轉(zhuǎn)分化為神經(jīng)元的效率存在差異27-34
• 四、Notch1信號通路在不同來源星形膠質(zhì)細胞內(nèi)的表達水平存在差異34-36
• 五、抑制星形膠質(zhì)細胞內(nèi)Notch1信號通路可提高其向神經(jīng)元直接轉(zhuǎn)分化的效率36-42
• 討論42-44
• 參考文獻44-48
• 文獻綜述 星形膠質(zhì)細胞在中樞神經(jīng)系統(tǒng)病理進程中的異質(zhì)性48-69
• 參考文獻57-69
• 在讀期間發(fā)表的文章和參加科研工作情況69-70
• 致謝70-71

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