發(fā)布時(shí)間：2021-11-21 22:29

　　實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1.建立體外誘導(dǎo)小鼠原始生殖樣細(xì)胞（primordial germ cell-like cells,PGCLCs）分化體系。2.鑒定體外誘導(dǎo)小鼠原始生殖細(xì)胞分化過(guò)程中長(zhǎng)鏈非編碼RNA（long noncoding RNA,lnc RNA）表達(dá)量的變化。3.對(duì)小鼠原始生殖細(xì)胞誘導(dǎo)過(guò)程中關(guān)鍵長(zhǎng)鏈非編碼RNA進(jìn)行功能預(yù)測(cè)。4.獲取小鼠體內(nèi)原始生殖細(xì)胞分化過(guò)程E5.5天外胚層細(xì)胞和E12.5天原始生殖細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)方法:首先,我們模擬小鼠原始生殖細(xì)胞（primordial germ cells,PGCs）體內(nèi)分化生成過(guò)程,在體外經(jīng)過(guò)兩步誘導(dǎo)方法建立PGCLCs誘導(dǎo)體系。起始細(xì)胞我們使用小鼠胚胎干細(xì)胞（ESC）,先經(jīng)過(guò)兩天貼壁培養(yǎng)誘導(dǎo)成為扁平狀的外胚層樣細(xì)胞（Epiblastlike cells,Epi LCs）,然后取合適的細(xì)胞數(shù)量采用懸滴培養(yǎng)的方式繼續(xù)誘導(dǎo)培養(yǎng)4-5天獲得原始生殖樣細(xì)胞（Primordial germ cell-like cells,PGCLCs）。我們使用PGCs分化特異性的標(biāo)記基因Blimp1-GFP指示體外誘導(dǎo)前期階段的成功,然后在需要收取分化樣品的第4天用CD6... 

【文章來(lái)源】：大連醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁(yè)數(shù)】：70 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

在體內(nèi)，PGC來(lái)源于胚胎E6.5-7.5天的植入后外胚層細(xì)胞，響應(yīng)來(lái)自胚外外胚層(extra-embryonicectoderm,ExE)的BMP和來(lái)自胚內(nèi)內(nèi)胚層(viscerralendoderm,VE)的BMP2信號(hào)

殖細(xì)胞與臨近的體細(xì)胞區(qū)分開來(lái)。BLIMP1 突變導(dǎo)致 E8.5 天的胞樣細(xì)胞異常，使他們更像臨近的體細(xì)胞[11]，通過(guò)野生型和 BL始生殖細(xì)胞的比較，發(fā)現(xiàn)了 Prdm14[12]。Prdm14 突變導(dǎo)致異常原。從 E8.5 天 H3K9me2 的全基因組的擦除來(lái)看，這些細(xì)胞表現(xiàn)缺失，部分原因是 Ehmt1-Ehmt2 介導(dǎo)的 H3K9 甲基化轉(zhuǎn)移酶活胞也表現(xiàn)出全基因組的 polycomb 酶 EZH2 介導(dǎo)的 H3K27me3 Prdm14 至少對(duì)早期生殖細(xì)胞的表觀遺傳程序很重要[13]。進(jìn)一P1 表達(dá)是被 PRDM14 所維持[14]。PRDM14 也誘導(dǎo) Dppa3 和 S表達(dá)。因此，無(wú)論是原始生殖細(xì)胞特化基因的表達(dá)還是多能基因-null 細(xì)胞中均不能發(fā)生[15]。而 Tcfap2c，編碼 AP2γ(BLIMP1 于 PGC 特化至關(guān)重要[12, 16]，因?yàn)檫@一基因的突變導(dǎo)致 PGC 在，BLIMP1、PRDM14 和 AP2γ共同組成了 PGC 特化的相互依

鼠配子發(fā)生的體外重構(gòu):mESC/iPSC在 ActA和 bFGF的作用下經(jīng)過(guò)兩天培養(yǎng)成為包括 BMP4 等細(xì)胞因子的刺激下，經(jīng)過(guò) 4-6 天的培養(yǎng)成為 PGCLC。雄性的 PGC分選移植到新生的 W/Wv品系的小鼠睪丸中，完成精子生成過(guò)程；雌性 PGCLC 經(jīng)，和胚體卵巢內(nèi)的體細(xì)胞共培養(yǎng)，形成 重構(gòu)卵巢 ，然后經(jīng)過(guò)一系列的表觀遺傳進(jìn)入減數(shù)分裂。長(zhǎng)鏈非編碼 RNA(Long non-coding RNA, lncRNA)乳動(dòng)物中，基于全基因組水平的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序發(fā)現(xiàn)，大約有三分之二的基被轉(zhuǎn)錄成 RNA，但是這與最終只有少于 2%的基因組 DNA 翻譯成蛋白比。即使蛋白質(zhì)可以被選擇性剪接和翻譯后修飾，基因組轉(zhuǎn)錄出的非還是要多于編碼蛋白的 RNA。這就說(shuō)明，非編碼 RNA 的調(diào)控在真核生中起到了非常重要的作用。非編碼 RNA（lncRNA）在數(shù)量上遠(yuǎn)少于信使 RNA（mRNA），其長(zhǎng)度


本文編號(hào)：3510370