采用免疫組化法、直接測序法、焦磷酸測序法分別對彌漫性腦膠質(zhì)瘤患者異檸檬酸脫氫酶1（IDH1）第132位精氨酸的突變進行檢測。結(jié)果表明:3種方法對高頻突變的檢出一致性為90.62%,免疫組化只能檢測出R132H突變類型,而兩種測序方法都能檢測出R132-其他類型的突變;焦磷酸測序檢出靈敏度最高達(dá)3%,直接測序法最經(jīng)濟和簡便,但靈敏度低,僅能檢測突變率為20%以上的突變。建議先用免疫組化和直接測序初篩IDH1基因突變,對發(fā)現(xiàn)的低頻突變用焦磷酸測序驗證。 

【文章來源】：實驗技術(shù)與管理. 2019,36(10)北大核心

【文章頁數(shù)】：4 頁

【部分圖文】：

免疫組化結(jié)果

趙煥英，等：免疫組化和直接測序以及焦磷酸測序?qū)DH1突變的比較研究75免疫組化結(jié)果為陰性；其余15例IDHlR132H免疫組織化陽性，4例為強陽性，6例為陽性，3例為弱陽性，見圖1。A-強陽性；B-陽性；C-弱陽性；D-陰性。圖1免疫組化結(jié)果3.2焦磷酸測序與直接測序結(jié)果利用含生物素標(biāo)記的IDH1引物樣本DNA經(jīng)毛細(xì)管電泳檢測條帶單一且大小為141bp，繼而進行生物素單鏈的獲取，于PyroMarkQ24測序儀上利用測序引物引導(dǎo)序列測定。圖2為焦磷酸測序結(jié)果，圖2中E—H對應(yīng)圖1的A—D。圖2中E顯示CAT占86%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于CGT14%，跟圖1A顯示強陽性結(jié)果一致，圖2中F對應(yīng)圖1B中陽性結(jié)果，CAT占55%，圖2中G對應(yīng)圖1中C陽性，CAT占21%，圖2中H中CAT檢測1%，對應(yīng)圖1中D陰性免疫組化，一般商用的PyroMark檢測試劑盒，其靈敏度都建議設(shè)在5%~10%之間，如MGMT[10]，不同的研究者針對IDH1132位點建立焦磷酸測序方法也有很多，報道的靈敏度一般不超過5%[11-12]，有研究者檢測靈敏度，甚至達(dá)到2%[13]。本方法建立中，構(gòu)建IDH1野生和突變質(zhì)粒，經(jīng)過數(shù)字PCR絕對定量后，按比例兩者混合，檢測到突變靈敏度為3%。這可能與擴增產(chǎn)物的長度不同、標(biāo)記的生物素位置不同、擴增產(chǎn)物的純度不同、及測序引物不同導(dǎo)致的檢測靈敏度會有差異。圖3為直接測序結(jié)果。圖2焦磷酸測序結(jié)果圖3直接測序結(jié)果

趙煥英，等：免疫組化和直接測序以及焦磷酸測序?qū)DH1突變的比較研究75免疫組化結(jié)果為陰性；其余15例IDHlR132H免疫組織化陽性，4例為強陽性，6例為陽性，3例為弱陽性，見圖1。A-強陽性；B-陽性；C-弱陽性；D-陰性。圖1免疫組化結(jié)果3.2焦磷酸測序與直接測序結(jié)果利用含生物素標(biāo)記的IDH1引物樣本DNA經(jīng)毛細(xì)管電泳檢測條帶單一且大小為141bp，繼而進行生物素單鏈的獲取，于PyroMarkQ24測序儀上利用測序引物引導(dǎo)序列測定。圖2為焦磷酸測序結(jié)果，圖2中E—H對應(yīng)圖1的A—D。圖2中E顯示CAT占86%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于CGT14%，跟圖1A顯示強陽性結(jié)果一致，圖2中F對應(yīng)圖1B中陽性結(jié)果，CAT占55%，圖2中G對應(yīng)圖1中C陽性，CAT占21%，圖2中H中CAT檢測1%，對應(yīng)圖1中D陰性免疫組化，一般商用的PyroMark檢測試劑盒，其靈敏度都建議設(shè)在5%~10%之間，如MGMT[10]，不同的研究者針對IDH1132位點建立焦磷酸測序方法也有很多，報道的靈敏度一般不超過5%[11-12]，有研究者檢測靈敏度，甚至達(dá)到2%[13]。本方法建立中，構(gòu)建IDH1野生和突變質(zhì)粒，經(jīng)過數(shù)字PCR絕對定量后，按比例兩者混合，檢測到突變靈敏度為3%。這可能與擴增產(chǎn)物的長度不同、標(biāo)記的生物素位置不同、擴增產(chǎn)物的純度不同、及測序引物不同導(dǎo)致的檢測靈敏度會有差異。圖3為直接測序結(jié)果。圖2焦磷酸測序結(jié)果圖3直接測序結(jié)果

【參考文獻】：
期刊論文
[1]異檸檬酸脫氫酶1基因突變焦磷酸測序檢測方法的建立[J]. 王丹慧,蔡彥寧,張燕莉,高杰,楊彩俠.  首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2014(02)



本文編號：3503068