目的:目前已報道了線粒體自噬等與細胞器相關的多種選擇性自噬,推測可能存在降解和清除細胞器高爾基體的高爾基體自噬。本課題擬證明一種新型選擇性自噬-高爾基體自噬的存在,發(fā)現(xiàn)高爾基體外膜蛋白GOLPH3能夠作為自噬受體蛋白調(diào)控高爾基體自噬的發(fā)生,且高爾基體自噬介導了apelin-13/APJ促心肌細胞肥大的過程。方法:1.采用熒光顯微鏡觀察高爾基體順式膜囊標志蛋白GM130-RFP與自噬標志蛋白LC3B-GFP的熒光共定位情況;2.采用熒光顯微鏡觀察高爾基體反式膜囊標志蛋白TGN46-RFP與自噬標志蛋白LC3B-GFP的熒光共定位情況;3.采用透射電鏡觀察高爾基體自噬的發(fā)生;4.采用免疫共沉淀技術觀察GOLPH3與LC3B的蛋白相互作用。5.采用siRNA干擾GOLPH3來觀察高爾基體自噬的情況;6.過表達APJ受體觀察高爾基體自噬的發(fā)生;7.免疫組化觀察尸檢心肌肥厚病人體內(nèi)GOLPH3的表達情況;8.細胞計數(shù)儀檢測心肌細胞直徑及體積。結果:1.饑餓誘導大鼠心肌細胞（H9c2）、人臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVECs）、人主動脈平滑肌細胞（HA-VSMCs）以及人胚胎腎細胞（HEK293T）內(nèi)的高... 

【文章來源】：南華大學湖南省

【文章頁數(shù)】：106 頁

【學位級別】：碩士

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摘要
Abstract
主要英文縮略語索引
第1章 緒論
第2章 實驗材料
    2.1 實驗細胞
    2.2 主要質(zhì)粒、抗體、試劑
    2.3 主要儀器
第3章 實驗方法
    3.1 細胞培養(yǎng)
    3.2 熒光共定位
    3.3 免疫共沉淀
    3.4 免疫印跡
    3.5 RNA干擾技術
    3.6 透射電鏡
    3.7 質(zhì)譜分析法
    3.8 免疫組織化學法
    3.9 H9c2心肌細胞肥大的檢測
    3.10 統(tǒng)計學方法
第4章 實驗結果
    4.1 饑餓、缺氧、雷帕霉素引起高爾基體標志蛋白和自噬標志蛋白發(fā)生熒光共定位
        4.1.1 饑餓誘導高爾基體標志蛋白和自噬標志蛋白發(fā)生熒光共定位
        4.1.2 缺氧誘導高爾基體標志蛋白和自噬標志蛋白發(fā)生熒光共定位
        4.1.3 雷帕霉素誘導高爾基體標志蛋白和自噬標志蛋白發(fā)生熒光共定位
    4.2 高爾基體應激誘導劑引起高爾基體標志蛋白和自噬標志蛋白發(fā)生熒光共定位
    4.3 Apelin-13、過表達APJ、AngII、壓應力均能誘導高爾基體標志蛋白和自噬標志蛋白發(fā)生熒光共定位
    4.4 透射電鏡結果顯示饑餓誘導高爾基體自噬
    4.5 透射電鏡結果顯示apelin-13、AngII及壓應力誘導高爾基體自噬
    4.6 饑餓、缺氧、雷帕霉素誘導GOLPH3與LC3B發(fā)生相互作用
    4.7 高爾基體應激誘導劑引起GOLPH3與LC3B發(fā)生相互作用
    4.8 Apelin-13、過表達APJ、AngII以及壓應力誘導GOLPH3與LC3B發(fā)生相互作用
    4.9 干擾GOLPH3的表達能夠抑制高爾基體自噬
    4.10 高爾基體自噬介導了Apelin-13/APJ促心肌細胞肥大
第5章 討論
第6章 結論
參考文獻
文獻翻譯
作者攻讀學位期間的科研成果
致謝



本文編號：3464380