目的建立一種具有靈敏性高,特異性強的巢式聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）方法檢測血液標本中布魯氏菌核酸DNA。方法使用細菌基因組提取試劑盒提取純菌核酸DNA;使用血液等組織基因組核酸DNA提取試劑盒提取血液標本核酸DNA,對提取的核酸DNA先行常規(guī)PCR預(yù)擴增,以擴增的PCR產(chǎn)物為模板進行熒光定量PCR第二次擴增（即巢式PCR）。對純菌提取的核酸DNA進行靈敏度和和特異性測試,構(gòu)建巢式PCR的Ct值與核酸DNA拷貝數(shù)之關(guān)系曲線;檢測臨床血液標本核酸DNA,同時比較常規(guī)兩種PCR方法檢測結(jié)果。結(jié)果常規(guī)PCR檢測的靈敏度為512個核酸DNA拷貝數(shù);巢氏PCR檢測有效范圍為921.6 ng/μl～6.8 fg/μl,對應(yīng)的Ct值為12.04～37.50,其指數(shù)關(guān)系為:y=(e^-0.695x)×10¹²;R²=0.998 6,巢式PCR擴增效率為2.28×10⁹倍,檢測限為2個布魯氏核酸DNA拷貝數(shù)。巢式PCR的靈敏度為91.67%,特異度為93.10%,陽性預(yù)測值為91.67%,陰性預(yù)測值為93.10%。對一起羊... 

【文章來源】：疾病監(jiān)測. 2020,35(03)

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

熒光定量PCR測得Ct值與DNA拷貝數(shù)之指數(shù)關(guān)系曲線Figure1IndexrelationshipcurveofDNAcopynumbersandCtvaluebythefluorescencequantitativePCR

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3443358