目的:間充質(zhì)干細胞在細胞治療以及重建醫(yī)學(xué)中具有重要的意義。人脂肪組織來源的干細胞具有較低的供體發(fā)病率、良好的可塑性、產(chǎn)量高等特點,使得它在骨重建過程中成為可靠的細胞種子來源。而提高脂肪干細胞的成骨分化能力能使得它更好地治療骨損傷。本研究利用干細胞因子處理脂肪干細胞并進行相關(guān)的成骨機制方面的研究,探討了AKT/m TOR信號通路對脂肪干細胞成骨的調(diào)控作用。方法:（1）采用I型膠原酶消化法從脂肪組織中分離得到脂肪干細胞,利用油紅-O檢測其成脂能力以及利用茜素紅染色檢測其成骨能力,利用流式細胞術(shù)鑒定其表面標(biāo)記物;（2）利用干細胞因子處理脂肪干細胞,通過MTT檢測不同濃度的干細胞因子對脂肪干細胞的增殖影響作用。通過熒光定量PCR以及茜素紅染色、堿性磷酸酶染色檢測脂肪干細胞在不同時間段的成骨情況;（3）熒光定量PCR、茜素紅染色、堿性磷酸酶染色以及western blotting實驗分析干細胞因子調(diào)控脂肪干細胞成骨的機制。結(jié)果:（1）從脂肪組織中提取的脂肪干細胞能夠進行貼壁生長、成脂成骨分化,細胞表面陽性表達CD105,CD73和CD90,而不表達CD45,CD34,CD14和HLA-DR;（2... 

【文章來源】：暨南大學(xué)廣東省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
中英文縮略語表
第一章 前言
    1.1 脂肪干細胞概述
    1.2 脂肪干細胞的應(yīng)用
        1.2.1 脂肪干細胞在骨疾病方面的應(yīng)用
        1.2.2 脂肪干細胞在其它方面的應(yīng)用
    1.3 干細胞因子
        1.3.1 干細胞因子的生物學(xué)特征
        1.3.2 干細胞因子在骨疾病方面的應(yīng)用
    1.4 AKT/mTOR信號通路
    1.5 本研究的目的及意義
第二章 試驗材料與方法
    2.1 材料與儀器
        2.1.1 細胞
        2.1.2 主要的儀器和設(shè)備
        2.1.3 試劑與耗材
    2.2 主要溶液配制
        2.2.1 細胞培養(yǎng)
        2.2.2 成骨誘導(dǎo)分化
        2.2.3 成脂誘導(dǎo)分化
        2.2.4 Western blotting
    2.3 實驗方法
        2.3.1 脂肪干細胞的分離提取流程
        2.3.2 ASCs的傳代
        2.3.3 ASCs的凍存
        2.3.4 SCF對ASCs的增殖測試（MTT法）
        2.3.5 ASCs成骨分化操作流程
        2.3.6 茜素紅染色
        2.3.7 堿性磷酸酶染色
        2.3.8 ASCs的成脂分化操作流程
        2.3.9 油紅-O染色
        2.3.10 實時熒光定量RT-qPCR法
        2.3.11 相關(guān)蛋白的檢測
        2.3.12 統(tǒng)計學(xué)分析
第三章 實驗結(jié)果與分析
    3.1 提取與鑒定人脂肪組織中的脂肪干細胞（ASCs）
    3.2 干細胞因子（SCF）對ASCs的增殖、分化及干性的作用
    3.3 SCF對ASCs成骨分化的作用
        3.3.1 SCF對ASCs成骨分化的作用濃度
        3.3.2 SCF在ASCs成骨分化過程中的影響
    3.4 抑制AKT/mTOR信號通路能夠促進SCF對ASCs成骨分化的作用
    3.5 討論
第四章 結(jié)論與展望
    4.1 全文總結(jié)
    4.2 創(chuàng)新之處
    4.3 展望
參考文獻
碩士期間發(fā)表論文
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]TGF-β/BMP signaling and other molecular events: regulation of osteoblastogenesis and bone formation[J]. Md Shaifur Rahman,Naznin Akhtar,Hossen Mohammad Jamil,Rajat Suvra Banik,Sikder M Asaduzzaman.  Bone Research. 2015(01)
[2]干細胞因子促進牙髓干細胞增殖與骨向分化能力[J]. 辛紅,陳潤良,裴英波.  中國組織工程研究與臨床康復(fù). 2010(14)



本文編號：3428808