目的探討miR-92a-3p_R+1和miR-92a-1-5p在氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）誘導大鼠血管平滑肌細胞（VSMC）表型轉化和增殖中的作用及其與ERK1/2信號通路的相關性。方法分離、培養(yǎng)大鼠VSMC,以ox-LDL（50 mg/L）誘導VSMC,采用ERK1/2特異性抑制劑U0126（10μmol/L）阻斷ox-LDL（50 mg/L）誘導VSMC的ERK1/2信號激活,MicroRNA微陣列分析VSMC的miR-92a-3p_R+1和miR-92a-1-5p表達,CCK-8法和Brdu流式細胞術檢測細胞增殖;免疫熒光法檢測VSMC收縮表型標志蛋白SM22α的變化;Western blot檢測VSMC的ERK1/2通路信號激活情況（ERK、p-ERK）、表型標志蛋白SM22α、細胞周期相關蛋白（PCNA、cyclin D1、p21、p27）的表達情況。結果 ox-LDL誘導下,VSMC的miR-92a-3p_R+1和miR-92a-1-5p表達明顯上調,VSMC的ERK1/2磷酸化水平明顯增加,SM22α的表... 

【文章來源】：中國動脈硬化雜志. 2019,27(11)

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

．原代大鼠平滑肌細胞形態(tài)學與免疫熒光鑒定A為普通顯微鏡下細胞交織融合成“谷峰狀”(100×);B為熒光顯微鏡下α-SMA陽性表達(200×)

92a-1-5p的調控靶基因，發(fā)現(xiàn)它們與細胞周期蛋白依賴激酶(CDKs)、Kruppel樣因子(KLFs)等密切相關(圖3)，但其相關機制有待進一步研究。表1．各組VSMCmiＲ-92a-3p_Ｒ+1和miＲ-92a-1-5p的表達Table1．ComparisonofVSMCmiＲ-92a-3p_Ｒ+1andmiＲ-92a-1-5pexpressionineachgroup分組miＲ-92a-3p_Ｒ+1miＲ-92a-1-5p空白對照組4893．00±169．032．00±0．58ox-LDL組6182．00±306．56a3．33±0．84U0126組3326．00±197．84b0．67±0．73ba為P＜0．05，與空白對照組比較;b為P＜0．05，與ox-LDL組比較。圖2．各組VSMC的p-EＲK的表達水平a為P＜0．05，與空白對照組比較;b為P＜0．05，與ox-LDL組比較。Figure2．Expressionofp-EＲKinVSMCofeachgroup2．3ox-LDL對VSMC增殖的影響及其與EＲK1/2通路的關系CCK-8法和Brdu流式細胞術測定細胞增殖(圖4、圖5)。與空白對照組比較，ox-LDL誘導促進VSMC細胞的增殖(P＜0．05)，PCNA、cyclinD1蛋白表達上調(P＜0．05)，p21和p27蛋白表達減少(P＜0．05);EＲK1/2通路阻斷后明顯抑制VSMC細胞的增殖，PCNA、cyclinD1蛋白表達降低(P＜0．05)，p21和p27蛋白表達上調(P＜0．05)差異有顯著性(P＜0．05;圖6)。2．4U0126對VSMC表型轉化標記蛋白SM22α表達的影響采用SM22α免疫熒光染色和WB檢測發(fā)現(xiàn)，SM22α蛋白表達水平較空白對照組下降(P＜0.05);U0126阻斷EＲK信號通路后，SM22α蛋白表達水平升高(P＜0．05，圖7)。圖3．靶基因預測miＲ-92a-3p_Ｒ+1和miＲ-92a-1-5p與VSMC表型轉化和增殖相關Figure3．TargetgenesofmiＲ-92a-3p_Ｒ+1andmiＲ-92a-1-5pwerefoundtoberelatedtophenotypictransformationandcellproliferationthroughTargetscan7．2database圖4．CCK-8法檢測VSMC增殖a為P＜0．0

92a-1-5p的調控靶基因，發(fā)現(xiàn)它們與細胞周期蛋白依賴激酶(CDKs)、Kruppel樣因子(KLFs)等密切相關(圖3)，但其相關機制有待進一步研究。表1．各組VSMCmiＲ-92a-3p_Ｒ+1和miＲ-92a-1-5p的表達Table1．ComparisonofVSMCmiＲ-92a-3p_Ｒ+1andmiＲ-92a-1-5pexpressionineachgroup分組miＲ-92a-3p_Ｒ+1miＲ-92a-1-5p空白對照組4893．00±169．032．00±0．58ox-LDL組6182．00±306．56a3．33±0．84U0126組3326．00±197．84b0．67±0．73ba為P＜0．05，與空白對照組比較;b為P＜0．05，與ox-LDL組比較。圖2．各組VSMC的p-EＲK的表達水平a為P＜0．05，與空白對照組比較;b為P＜0．05，與ox-LDL組比較。Figure2．Expressionofp-EＲKinVSMCofeachgroup2．3ox-LDL對VSMC增殖的影響及其與EＲK1/2通路的關系CCK-8法和Brdu流式細胞術測定細胞增殖(圖4、圖5)。與空白對照組比較，ox-LDL誘導促進VSMC細胞的增殖(P＜0．05)，PCNA、cyclinD1蛋白表達上調(P＜0．05)，p21和p27蛋白表達減少(P＜0．05);EＲK1/2通路阻斷后明顯抑制VSMC細胞的增殖，PCNA、cyclinD1蛋白表達降低(P＜0．05)，p21和p27蛋白表達上調(P＜0．05)差異有顯著性(P＜0．05;圖6)。2．4U0126對VSMC表型轉化標記蛋白SM22α表達的影響采用SM22α免疫熒光染色和WB檢測發(fā)現(xiàn)，SM22α蛋白表達水平較空白對照組下降(P＜0.05);U0126阻斷EＲK信號通路后，SM22α蛋白表達水平升高(P＜0．05，圖7)。圖3．靶基因預測miＲ-92a-3p_Ｒ+1和miＲ-92a-1-5p與VSMC表型轉化和增殖相關Figure3．TargetgenesofmiＲ-92a-3p_Ｒ+1andmiＲ-92a-1-5pwerefoundtoberelatedtophenotypictransformationandcellproliferationthroughTargetscan7．2database圖4．CCK-8法檢測VSMC增殖a為P＜0．0

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
[1]MLCK通過miRNA-92a調控血管平滑肌細胞增殖與遷移[D]. 張晨旭.大連醫(yī)科大學 2016



本文編號：3358699