新生鼠T細胞胸腺內外凋亡動態(tài)分析
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【摘要】:目的探究小鼠出生后胸腺細胞的動態(tài)發(fā)育及胸腺細胞胸腺內外凋亡的狀況,為進一步闡明胸腺細胞胸腺內外凋亡的真實狀況提供新的證據。方法以剛出生后1天、3天、7天、14天和28天的C57BL/6小鼠為細胞凋亡檢測對象:分別取胸腺、脾臟及血液制備細胞懸液;取出生后7、14天的C57BL/6小鼠的胸腺及脾臟器官,制備冰凍切片。懸浮細胞進行以下處理:(1)胸腺細胞紫外照射及地塞米松誘導為陽性對照組;(2)CD3抗體及Annexin V/7-AAD聯合染色;(3)F4/80抗體染色;(4)Annexin V-Alexa Fluor488/PI雙染;(5)提取細胞DNA。分別利用流式細胞術、熒光顯微鏡及瓊脂糖凝膠電泳技術進行細胞凋亡相關檢測;胸腺及脾臟冰凍切片進行TUNEL染色,利用熒光顯微鏡對凋亡細胞進行原位觀察。結果在自然狀態(tài)下,小鼠胸腺細胞中CD3+T細胞百分率隨日齡增長變化幅度不大,而外周免疫器官(脾臟)中CD3+T細胞含量顯著增加;小鼠胸腺細胞平均凋亡率約為1.6%,不同日齡間未見明顯差異;各時間點脾臟、血液中CD3+T細胞凋亡率及巨噬細胞比率均顯著高于胸腺。結論在自然狀態(tài)下幼齡小鼠胸腺功能已接近成熟穩(wěn)定,而外周免疫器官(脾臟)隨小鼠的年齡不斷發(fā)育變化;小鼠脾臟、血液中CD3+T細胞凋亡率顯著高于胸腺,提示除胸腺外,脾臟及血液可能為T細胞完全成熟前的凋亡部位。
【關鍵詞】:胸腺細胞 凋亡 流式細胞術
【學位授予單位】:遼寧醫(yī)學院
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2015
【分類號】:R392.12
【目錄】:
- 中文論著摘要4-5
- 英文論著摘要5-7
- 英文縮略語表7-9
- 前言9-11
- 實驗材料與方法11-16
- 實驗結果16-25
- 討論25-28
- 結論28-29
- 本研究創(chuàng)新性的自我評價29-30
- 參考文獻30-32
- 附錄32-41
- 綜述32-38
- 參考文獻35-38
- 在學期間科研成績38-39
- 致謝39-40
- 個人簡介40-41
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