目的建立小鼠巨細(xì)胞病毒（Mouse Cytomegalovirus,MCMV）熒光定量PCR方法并對其進(jìn)行初步應(yīng)用。方法選取NCBI發(fā)表的MCMV Smith株DNA polymerase基因保守序列設(shè)計(jì)引物探針,建立MCMV的熒光定量PCR方法,對方法的特異性、敏感性、重復(fù)性及穩(wěn)定性進(jìn)行驗(yàn)證,并應(yīng)用該方法檢測摻入MCMV的小鼠血液樣品及2018年度送檢的409份小鼠血液樣本。結(jié)果建立的MCMV熒光定量PCR方法標(biāo)準(zhǔn)曲線Slope為-3. 418,R2值為0. 999,擴(kuò)增效率為96. 137%,可定量檢測到的MCMV最低含量為47 copies/μL。以大鼠巨細(xì)胞病毒,猴巨細(xì)胞病毒,人單純皰疹病毒,偽狂犬病毒及貓皰疹病毒I型為模板均無擴(kuò)增曲線,特異性良好。方法組內(nèi)和組間變異系數(shù)分別為0. 39%～0. 68%和0. 48%～1. 01%,重復(fù)性和穩(wěn)定性好。可檢測到摻入小鼠血液樣品中MCMV病毒的最大稀釋度為1∶1000（100. 75 TCID50/0. 1 m L）,409份小鼠血液樣品經(jīng)檢測均為陰性。結(jié)論建立的小鼠巨細(xì)胞病毒熒光定量PCR方法有很好的敏感性、特異性及穩(wěn)定性,可有效... 

【文章來源】：實(shí)驗(yàn)動物科學(xué). 2019,36(06)

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

MCMV熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線

MCMV熒光定量PCR方法擴(kuò)增曲線

如圖3所示，4.7×109～4.7×101copies/μL各稀釋度的質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品均出現(xiàn)S型擴(kuò)增曲線，而4.7×100copies/μL的3個(gè)平行實(shí)驗(yàn)有1個(gè)未出現(xiàn)S型擴(kuò)增曲線，說明本方法最低可定量檢測到47copies/μL的樣品。用MCMV FQ-PCR方法和常規(guī)PCR方法檢測同樣的10-1至10-8系列稀釋的MCMV核酸樣品，由圖4可見，MCMV FQ-PCR方法最低可檢測到10-4稀釋度的MCMV核酸，常規(guī)PCR最低可檢測到10-2稀釋度，表明MCMV FQ-PCR方法敏感性比常規(guī)PCR方法高兩個(gè)數(shù)量級;用建立的MCMV FQ-PCR方法與文獻(xiàn)報(bào)道的FQ-PCR方法檢測相同的10-1至10-8系列稀釋的MCMV核酸樣品，每個(gè)稀釋度做3個(gè)平行，兩種方法檢測到的最大稀釋度均為10-4，但本方法每個(gè)稀釋度的Ct值均值均低于文獻(xiàn)方法(表3)，說明本方法的敏感性高于文獻(xiàn)方法。圖4 MCMV熒光定量PCR方法(A)與常規(guī)PCR方法(B)敏感性比較

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3282604