發(fā)布時間：2017-04-18 21:20

  本文關(guān)鍵詞：miR-9與MCPIP1互作對流感病毒復(fù)制的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：A型流感病毒(Influenza A virus,IAV)主要侵襲呼吸道上皮細(xì)胞,引起從輕微的上呼吸道感染到嚴(yán)重肺炎等不同程度的臨床癥狀。mi RNA(micro RNA)家族是一類小的非編碼RNA,可調(diào)控其下游靶基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯,且在多種生理和病理進(jìn)程中都扮演著重要的角色,其中包括病毒與宿主的相互作用。既往的研究表明病毒可以通過改變宿主細(xì)胞mi RNA的表達(dá)模式,進(jìn)而重塑宿主細(xì)胞內(nèi)的微環(huán)境以利于病毒的感染、復(fù)制和增殖。我們前期基于組學(xué)的研究結(jié)果表明,IAV感染可以誘導(dǎo)宿主mi R-9的表達(dá)。為了探究mi R-9在IAV感染中的作用及其機(jī)制,我們進(jìn)行了以下研究工作。首先,我們充分驗證了不同IAV亞型感染A549細(xì)胞后不同時間點mi R-9的表達(dá),結(jié)果確證IAV感染可以顯著誘導(dǎo)mi R-9的表達(dá),且其表達(dá)峰值的出現(xiàn)早于IAV基質(zhì)蛋白基因(M)和核蛋白基因(NP)的表達(dá)。mi R-9與IAV感染表型關(guān)聯(lián)的研究表明,過表達(dá)mi R-9后顯著促進(jìn)了病毒結(jié)構(gòu)蛋白基因在RNA和蛋白水平的表達(dá)以及感染性子代病毒的產(chǎn)生,而抑制mi R-9表達(dá)時則顯著抑制IAV的增殖。為了解析mi R-9的作用機(jī)制,我們預(yù)測得到了4452個mi R-9潛在作用的靶基因,通過GO注釋分析等系列生物信息學(xué)分析確定了一個待驗證的靶基因——單核細(xì)胞誘導(dǎo)蛋白1(monocyte chemoattractant protein 1-induced protein 1,MCPIP1)。其次,有關(guān)MCPIP1既往研究的回溯提示我們其既可通過其泛素化酶活性和RNA酶活性負(fù)向調(diào)控炎癥相關(guān)信號通路,也可以因其RNA酶活性靶向并降解病毒RNA而實現(xiàn)廣譜抗病毒。在這部分的工作中,我們在功能學(xué)方面全面驗證了MCPIP1對IAV增殖的抑制作用,結(jié)果表明MCPIP1過表達(dá)后明顯抑制病毒結(jié)構(gòu)蛋白基因在RNA和蛋白水平的表達(dá)以及感染性子代病毒的產(chǎn)生,而抑制MCPIP1表達(dá)時則顯著促進(jìn)了IAV的增殖。以往的研究還表明MCPIP1主要特異性識別RNA莖環(huán)結(jié)構(gòu),并在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控RNA的穩(wěn)定性。據(jù)此,我們通過檢測RNA半衰期的方法證實了MCPIP1是通過靶向降解和縮短IAV M和NP基因m RNA的半衰期,進(jìn)而抑制了病毒基因的表達(dá)。此外,對IAV總共8個m RNA二級結(jié)構(gòu)預(yù)測結(jié)果表明,其每個基因節(jié)段的二級結(jié)構(gòu)中包含眾多的莖環(huán)結(jié)構(gòu),這提示我們MCPIP1具備潛在靶向和降解IAV各節(jié)段基因表達(dá)的物質(zhì)基礎(chǔ)。最后,為了回答IAV是否通過mi R-9直接靶向抑制MCPIP1的表達(dá)進(jìn)而有利于自身復(fù)制,我們開展了下述工作。通過熒光酶報告基因?qū)嶒�、Real-time PCR和western blot實驗確證mi R-9可以直接靶向并反向調(diào)控MCPIP1的表達(dá)。mi R-9與MCPIP1共轉(zhuǎn)染細(xì)胞后檢測病毒結(jié)構(gòu)蛋白和感染性子代病毒的實驗結(jié)果表明mi R-9可通過直接抑制MCPIP1促進(jìn)IAV的復(fù)制,至少部分通過MCPIP1途徑實現(xiàn)。上述研究結(jié)果表明,IAV可以有效利用宿主的mi R-9以微調(diào)細(xì)胞內(nèi)的微環(huán)境,通過mi R-9/MCPIP1互作有效抑制宿主抗病毒應(yīng)答,最終有利于病毒自身感染和復(fù)制的完成。
【關(guān)鍵詞】：miR-9 單核細(xì)胞誘導(dǎo)蛋白-1 流感病毒 復(fù)制
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R373;S852.65
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 英文縮寫詞表9-11
• 引言11-13
• 第一篇 文獻(xiàn)綜述13-25
• 第一章 miRNA與病毒復(fù)制13-22
• 1 病毒編碼的miRNA與病毒復(fù)制13-16
• 2 宿主編碼的miRNA對病毒復(fù)制的影響16-21
• 小結(jié)21-22
• 第二章 MCPIP1的研究進(jìn)展22-25
• 1 MCPIP1的發(fā)現(xiàn)22
• 2 MCPIP1的結(jié)構(gòu)22-23
• 3 MCPIP1的RNase酶活性與生物學(xué)功能23-24
• 4 MCPIP1 的去泛素化酶活性與生物學(xué)功能24
• 小結(jié)24-25
• 第二篇 研究內(nèi)容25-66
• 第一章 IAV誘導(dǎo)表達(dá)的miR-9 促進(jìn)了病毒的IAV復(fù)制25-43
• 1 材料25-26
• 2 方法26-32
• 3 結(jié)果32-39
• 4 討論39-42
• 5 小結(jié)42-43
• 第二章 MCPIP1對IAV復(fù)制的影響43-57
• 1 材料43-44
• 2 方法44-47
• 3 結(jié)果47-54
• 4 討論54-56
• 5 小結(jié)56-57
• 第三章 miR-9 通過靶向MCPIP1調(diào)控流感病毒復(fù)制57-66
• 1 材料57
• 2 方法57-60
• 3 結(jié)果60-64
• 4 討論64-65
• 5 小結(jié)65-66
• 結(jié)論66-67
• 參考文獻(xiàn)67-74
• 導(dǎo)師簡介74-75
• 作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果75-76
• 致謝76

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