目的本研究旨在構(gòu)建人FcγRIIb基因的真核表達(dá)重組質(zhì)粒pEGFP-FcγRIIb,并檢測(cè)其在真核細(xì)胞NIH3T3及BALB/c小鼠體內(nèi)的表達(dá),為后續(xù)的體內(nèi)研究奠定基礎(chǔ)。方法提取U937細(xì)胞的總RNA,采用RT-PCR法擴(kuò)增人FcγRIIb基因編碼區(qū)片段。用限制性內(nèi)切酶HindⅢ和SmaⅠ雙酶切空質(zhì)粒pEGFP-C1獲得線性化質(zhì)粒。將擴(kuò)增出的目的片段與線性質(zhì)粒pEGFP-C1連接,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pEGFP-FcγRIIb,經(jīng)PCR、限制性核酸內(nèi)切酶酶切及DNA測(cè)序鑒定后,采用脂質(zhì)體法將重組表達(dá)質(zhì)粒pEGFP-FcγRIIb轉(zhuǎn)染到真核細(xì)胞NIH3T3中,同時(shí)設(shè)空質(zhì)粒pEGFP-C1和細(xì)胞對(duì)照組,用熒光顯微鏡觀察細(xì)胞瞬時(shí)表達(dá)。經(jīng)G418篩選3W,熒光顯微鏡下觀察陽(yáng)性細(xì)胞約為80%時(shí),提取細(xì)胞的總蛋白,用Western blot方法進(jìn)一步鑒定人的FcγRIIB的表達(dá)情況。將重組質(zhì)粒pEGFP-FcγRIIb注射到BALB/c小鼠肌肉中,并設(shè)空質(zhì)粒pEGFP-C1和PBS對(duì)照組。三組小鼠分別注射pEGFP-FcγRIIb（50μg）、pEGFP-C1（50μg）及PBS（50μL）,2w后以... 

【文章來(lái)源】：寧夏醫(yī)科大學(xué)寧夏回族自治區(qū)

【文章頁(yè)數(shù)】：81 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

質(zhì)粒pEGFP-C1的物理圖譜

FcγRIIb基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果

pEGFP-FcγRIIb正向測(cè)序的結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]FcγRⅡ b調(diào)控漿細(xì)胞的存活和凋亡[J]. 王勇.  國(guó)際免疫學(xué)雜志. 2007 (05)

碩士論文
[1]FcγRⅡB在重癥肌無(wú)力中的表達(dá)及其與抗AChR抗體的關(guān)系[D]. 翦愛(ài).中南大學(xué) 2009



本文編號(hào)：3120104