目的：考察自制的陽離子脂質(zhì)體作為載體，在小鼠體內(nèi)遞送DNA及RNA的效果及其體內(nèi)安全性。方法：（1）以熒光素酶為目的基因，分別以自制的8種陽離子脂質(zhì)體為載體，對(duì)攜帶熒光素酶基因的質(zhì)粒pGFP-N2在小鼠體內(nèi)進(jìn)行轉(zhuǎn)染。通過Western Blotting檢測(cè)轉(zhuǎn)染后小鼠肺和肝臟中熒光素酶的表達(dá)，評(píng)價(jià)陽離子脂質(zhì)體在小鼠體內(nèi)遞送DNA的效果。（2）以自制的4種陽離子脂質(zhì)體為載體轉(zhuǎn)染小鼠，對(duì)載脂蛋白B（Apoplipoprotein B，Apo B）進(jìn)行體內(nèi)RNA干擾。RT-PCR檢測(cè)小鼠肝臟中ApoBmRNA的表達(dá)，ELISA、Western Blotting檢測(cè)小鼠肝臟及血漿中Apo B蛋白的表達(dá)，評(píng)價(jià)陽離子脂質(zhì)體在小鼠體內(nèi)遞送siRNA的效果。（3）在進(jìn)行體內(nèi)轉(zhuǎn)染的同時(shí)通過考察小鼠的體重變化、內(nèi)臟變化、死亡率等指標(biāo)評(píng)價(jià)所用陽離子脂質(zhì)體的體內(nèi)安全性。結(jié)果：（1）以自制的8種陽離子脂質(zhì)體9、10、17、19、20、21、22、CD01為載體進(jìn)行體內(nèi)DNA轉(zhuǎn)染，通過Western Blotting檢測(cè)到轉(zhuǎn)染組小鼠肝臟和肺中有熒光素酶蛋白的表達(dá)，表明所考察的陽離子脂質(zhì)體均有體內(nèi)遞送DNA的作用，且... 

【文章來源】：大連醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

脂質(zhì)體CD01為轉(zhuǎn)染載體時(shí)小鼠肝臟中熒光素酶蛋白的表達(dá)

圖 2 脂質(zhì)體 10 為轉(zhuǎn)染載體時(shí)小鼠肺中熒光素酶蛋白的表達(dá)Fig.2 Expression of luciferase in mice lungs using liposome 10 as a carriertern Blotting analysis for luciferase in lungs of the tested mice. M:luciferase;N:Ncontrol;1,2,3,4:liposome 10;5: Adding no carrier.以脂質(zhì)體 10 為載體殼聚糖為促進(jìn)劑轉(zhuǎn)染時(shí)小鼠肝和肺組織中熒達(dá)一步考察以陽離子脂質(zhì)體 10 作為載體，殼聚糖為粘附劑和吸收促的影響。轉(zhuǎn)染 48h，以 Western Blotting 的方法檢測(cè)小鼠肝（圖 3A 3B）中熒光素酶蛋白的表達(dá)，結(jié)果表明殼聚糖對(duì)轉(zhuǎn)染具有促進(jìn)作，加入殼聚糖后熒光素酶蛋白的表達(dá)量高于僅用脂質(zhì)體 10 的情況

圖 2 脂質(zhì)體 10 為轉(zhuǎn)染載體時(shí)小鼠肺中熒光素酶蛋白的表達(dá)Fig.2 Expression of luciferase in mice lungs using liposome 10 as a carrierstern Blotting analysis for luciferase in lungs of the tested mice. M:luciferase;N:Negcontrol;1,2,3,4:liposome 10;5: Adding no carrier.3 以脂質(zhì)體 10 為載體殼聚糖為促進(jìn)劑轉(zhuǎn)染時(shí)小鼠肝和肺組織中熒光達(dá)進(jìn)一步考察以陽離子脂質(zhì)體 10 作為載體，殼聚糖為粘附劑和吸收促進(jìn)的影響。轉(zhuǎn)染 48h，以 Western Blotting 的方法檢測(cè)小鼠肝（圖 3A） 3B）中熒光素酶蛋白的表達(dá)，結(jié)果表明殼聚糖對(duì)轉(zhuǎn)染具有促進(jìn)作用，加入殼聚糖后熒光素酶蛋白的表達(dá)量高于僅用脂質(zhì)體 10 的情況。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]尾靜脈大容量快速注射法介導(dǎo)的人凝血因子Ⅸ基因在小鼠肝內(nèi)的高效表達(dá)[J]. 賀晨霞,馮登敏,陳立,陳浩明,姚紀(jì)花,沈琦,盧大儒,薛京倫,吳文君,丁友法.  科學(xué)通報(bào). 2003(05)



本文編號(hào)：3088127