炎癥反應是機體用以抵御病原微生物侵害的一種常見的病理過程。病原微生物感染宿主會誘發(fā)大量促炎細胞因子的產(chǎn)生,其中包括腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor, TNF）和白介素1（interleukin-1, IL-1）。促炎細胞因子的產(chǎn)生將誘導轉錄因子NF-κB（nuclear factor κB）的激活并啟動下游炎癥相關基因的表達,從而誘發(fā)炎癥反應。TAK1是TNFa和IL-1β介導的NF-κB和JNK激活的重要組成部分。到目前為止已經(jīng)有很多報道證實TAK1的多聚泛素修飾能參與了TAK1-介導的信號通路,比如TRAF6介導的TAK1的K34殘基上K63-連接的多聚泛素化與TGFβ通路中TAK1的激活有關。然而,TAK1在TNFα和IL-1β信號通路中的分子調節(jié)機理還不是十分清楚。因此,我們在一個包含352個泛素相關酶的cDNA文庫中篩選影響TNFα和IL-1β誘導的NF-κB激活的基因,并最終鑒定出能夠調節(jié)NF-κB的分子TRIM8。已有許多文獻報道TRIM家族蛋白在調控病毒引起的免疫應答中具有重要作用。在我們的研究中,TRIM8在過量表達時可顯著上調由TNFα和IL... 

【文章來源】：武漢大學湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 研究背景
    1.1 炎癥反應及其調節(jié)機理
        1.1.1 炎癥反應
        1.1.2 促炎細胞因子TNF及其調節(jié)機理
        1.1.3 促炎細胞因子IL-1及其調節(jié)機理
    1.2 NF-κB信號轉導通路及其調節(jié)機理
        1.2.1 NF-κB家族蛋白及其調節(jié)機理
        1.2.2 IκB家族蛋白及其調節(jié)機理
        1.2.3 IKK家族蛋白及其調節(jié)機理
        1.2.4 NF-κB信號轉導通路調節(jié)機理
            1.2.4.1 TNFR介導的經(jīng)典NF-κB通路
            1.2.4.2 TLR/IL-1R介導的經(jīng)典NF-κB通路
            1.2.4.3 TRAF2/6介導的IKK活化
            1.2.4.4 TAK1及其介導的IKK和JNK活化
            1.2.4.5 非經(jīng)典NF-κB通路調節(jié)機理
        1.2.5 泛素及其在NF-κB通路中的調控機理
    1.3 TRIM家族在炎癥反應中的調控機理
2 實驗材料和實驗方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細胞系、細胞培養(yǎng)材料和病毒來源
        2.1.2 細胞因子
        2.1.3 表達載體
        2.1.4 抗體
        2.1.5 核酸操作及檢測試劑盒
        2.1.6 特殊儀器和設備
        2.1.7 其它試劑
        2.1.8 其它耗材
    2.2 實驗方法
        2.2.1 細胞培養(yǎng)和瞬時轉染
        2.2.2 表達載體構建和質粒純化
        2.2.3 熒光素酶報告基因實驗
        2.2.4 抗體制備
        2.2.5 免疫共沉淀和Western Blot檢測
        2.2.6 泛素化實驗
        2.2.7 實時定量熒光PCR
        2.2.8 建立穩(wěn)定細胞系實驗
        2.2.9 通過逆轉錄病毒載體構建穩(wěn)定表達細胞系
3 實驗結果與討論
    3.1 研究背景與立項依據(jù)
    3.2 實驗結果與分析
        3.2.1 過量表達TRIM8正調控TNFα和IL-1β信號通路
        3.2.2 下調TRIM8基因的表達抑制NF-κB的激活
        3.2.3 TRIM8突變體抑制TAK1介導的NF-κB的激活
        3.2.4 TRIM8與TAK1具有相互作用
        3.2.5 TRIM8增強TAK1的多聚泛素化
        3.2.6 下調TRIM8基因表達減弱TAK1的K63-連接多聚泛素化
        3.2.7 下調TRIM8基因表達減弱由TNFα和IL-1β誘導的TAK1、IKKα/β以及IκBα的磷酸化
        3.2.8 下調TRIM8表達抑制IκBα的降解
        3.2.9 TRIM8增強TNFα和IL-β介導的AP1的激活
    3.3 實驗討論與展望
參考文獻
縮略詞表
作者簡介
致謝



本文編號：3024727