目的:探索一種基于CLARITY技術(shù)的快速肝組織透明化手段,通過條件優(yōu)化對肝硬化動物模型進行免疫熒光標記三維成像,并基于該技術(shù)開發(fā)一種石蠟切片的抗體洗脫術(shù)。方法:（1）水凝膠灌注大鼠,取出肝臟待水凝膠凝固后切為1mm薄片。切片隨機分為兩組,對照組采用常規(guī)被動脂質(zhì)清除法處理,實驗組置于特制電泳裝置中,在外加電場條件下洗滌脂質(zhì),通過提高電泳溫度并量化組織透明度,探索最優(yōu)肝透明化條件。（2）使用肝透明優(yōu)化條件對DEN誘導(dǎo)的大鼠肝硬化模型進行脂質(zhì)清除,利用多種大鼠器官組織探索免疫熒光標記成像條件,對大鼠肝硬化模型組織實施激光共聚焦顯微鏡掃描三維成像。（3）將CLARITY技術(shù)的水凝膠固定、脂質(zhì)清除和抗體洗脫特性應(yīng)用于石蠟切片,探索石蠟切片的透明化方法的最佳條件,進行抗體洗脫,并與常規(guī)酸洗脫進行對比。通過對比免疫熒光標記切片洗脫前后熒光信號變化及積分熒光強度測定來確定抗體洗脫效果。結(jié)果:（1）實驗組在12V電壓下37℃電泳48h時肝切片相對透明度達到最高并保持至96h,隨后相對透明度開始下降,而在48h電泳清除脂質(zhì)后提高溫度繼續(xù)電泳48h,肝組織切片相對透明度可進一步提高且對照組脂質(zhì)清除速度明顯... 

【文章來源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

大鼠器官被動脂質(zhì)清除后光學(xué)透明度變化

ETC設(shè)備原理圖

肝切片常規(guī)ETC與被動清除48h灰度值對比

【參考文獻】：
期刊論文
[1]CLARITY技術(shù)及其在生物學(xué)研究中的應(yīng)用進展[J]. 鄔國斌,何劍波,連芳.  中國癌癥防治雜志. 2015(02)
[2]免疫酶雙重染色中抗體洗脫的進一步研究[J]. 宋天保,王麗蓉.  中國組織化學(xué)與細胞化學(xué)雜志. 1992(02)



本文編號：3018700