目的通過在人胚胎干細(xì)胞定向分化為定型內(nèi)胚層過程中,干擾SNAI1基因的表達(dá),觀察其對細(xì)胞命運(yùn)及遷移運(yùn)動能力的影響。方法采用激活素A誘導(dǎo)人胚胎干細(xì)胞向定型內(nèi)胚層細(xì)胞分化,實(shí)驗(yàn)分為兩組:對照組轉(zhuǎn)染陰性對照siRNA,實(shí)驗(yàn)組轉(zhuǎn)染siSNAI1。通過實(shí)時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）和蛋白免疫印跡鑒定siSNAI1的干擾效果;通過qRT-PCR和細(xì)胞免疫熒光檢測定型內(nèi)胚層標(biāo)志物的表達(dá)情況;通過細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)測定細(xì)胞的遷移運(yùn)動能力。結(jié)果由于siSNAI1的干擾作用,細(xì)胞內(nèi)SNAI1的mRNA含量顯著降低,SNAI1蛋白的表達(dá)受阻;干擾SNAI1的表達(dá)會顯著抑制定型內(nèi)胚層標(biāo)志物FOXA2、GATA4、GATA6以及細(xì)胞遷移運(yùn)動有關(guān)基因TGFβ1、KLF8的表達(dá),細(xì)胞的遷移能力下降。結(jié)論 SNAI1決定內(nèi)胚層分化效率和細(xì)胞遷移能力的獲得。 

【文章來源】：廣東藥科大學(xué)學(xué)報. 2019,35(06)

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經(jīng)si SNAI1處理后細(xì)胞內(nèi)SNAI1蛋白含量

圖3 分化過程中經(jīng)si SNAI1處理后細(xì)胞表達(dá)FOXA2的情況

圖3 分化過程中經(jīng)si SNAI1處理后細(xì)胞表達(dá)FOXA2的情況3.3 干擾SNAI1基因的表達(dá)對GATA4、GATA6、TGFβ1、KLF8 mRNA表達(dá)的影響


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