本文關(guān)鍵詞：重組人膠原綁定骨形態(tài)發(fā)生蛋白2在大腸桿菌中的表達、純化與復(fù)性，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:利用大腸桿菌表達體系制備帶有膠原結(jié)合結(jié)構(gòu)域(CBD)的骨形態(tài)發(fā)生蛋白2(BMP2),研究CBD-BMP2表達、純化及復(fù)性的條件和方法。方法:將具有膠原結(jié)合能力的CBD基因序列克隆入BMP2基因序列的N端,構(gòu)建重組蛋白表達質(zhì)粒pet21b/CBD-BMP2,轉(zhuǎn)化入工程性大腸桿菌BL21菌株內(nèi);37℃條件下添加誘導(dǎo)劑異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)持續(xù)誘導(dǎo)表達;采用Ni-NTA親和層析柱進行純化;運用超純水稀釋復(fù)性法對純化后的CBD-BMP2進行復(fù)性;0.22μm微孔濾膜對復(fù)性后蛋白除菌,通過除菌前后蛋白濃度比值計算回收率;聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)檢測重組蛋白表達、純化以及復(fù)性;BCA蛋白定量法測定蛋白濃度。結(jié)果:重組質(zhì)粒pet21b/CBD-BMP2在工程性大腸桿菌中得到充分表達;CBD-BMP2以包涵體形式表達;SDS-PAGE分析,8mol·L~(-1)尿素存在條件下目的蛋白溶解于裂解液上清中,經(jīng)純化后目的蛋白單體存在于洗脫液B中,單體相對分子質(zhì)量約為14 000;稀釋復(fù)性后SDS-PAGE分析,相對分子質(zhì)量14 000及28 000處可見2條清晰條帶,重組蛋白單鏈成功復(fù)性為二聚體結(jié)構(gòu),相對分子質(zhì)量約為28 000;過濾除菌前后目的蛋白濃度分別為110和80mg·L~(-1),回收率約為73%。結(jié)論:重組CBD-BMP2載體成功轉(zhuǎn)化至大腸桿菌內(nèi),CBD-BMP2蛋白得到了高效的表達和復(fù)性。建立了利用原核表達體系制備重組CBD-BMP2蛋白的實驗方法。
【作者單位】： 吉林大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院衛(wèi)生檢驗學(xué)教研室;中國科學(xué)院長春應(yīng)用化學(xué)研究所再生醫(yī)學(xué)材料課題組;
【關(guān)鍵詞】： 膠原結(jié)合結(jié)構(gòu)域 骨形態(tài)發(fā)生蛋白 包涵體 復(fù)性
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助課題(51203152) 吉林省科技廳科技發(fā)展計劃國際合作項目資助課題(20130413059GH)
【分類號】：Q78;R3411
【正文快照】： 骨形態(tài)發(fā)生蛋白2(bone morphogeneticprotein-2,BMP2)是骨形態(tài)發(fā)生蛋白家族(bonemorphogenetic proteins,BMPs)中研究較多也是臨床廣泛應(yīng)用的一種生長因子。BMPs為人體內(nèi)具有多種功能的轉(zhuǎn)化生長因子(transforming growthfactor,TGF)β超家族中的一系列生長因子,在人體細胞增殖

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本文編號：301484