[目的]：考察急性應激誘導大鼠海馬Akt/FKHRL1信號通路活性的改變及其時效性；探討心理應激的大鼠模型。[材料和方法]：1.實驗動物：雄性SD大鼠,體重280±20g,每籠5只于動物房常規(guī)飼養(yǎng)。2.實驗試劑：①一次抗體[P-Akt（Ser-473）、Akt（Ser-473）、P-FKHRL1 （Thr-32）、FKHRL1（Thr-32）],羊抗兔多克隆二次抗體；②增強型化學發(fā)光系統(tǒng)（enhanced chemiluminescent system, ECL）試劑盒；③大鼠ACTH放免試劑盒。3.實驗方法：所有動物在飼養(yǎng)七天后隨機分配為正常對照組（C）、軀體應激組（S）和心理應激組（PS）。對S組建立急性足底應激模型,對PS組通過讓其看和聽到同伴的應激制造心理應激模型,觀察急性應激后大鼠海馬Akt/FKHRL1信號通路的活性改變情況和其變化的時效性及應激后血漿促腎上腺皮質激素（ACTH）的動態(tài)變化,并與對照組相比較。Akt/FKHRL1信號通路的活性用蛋白質印跡（Western blotting）方法測定其磷酸化水平。用放射免疫方法測定血漿ACTH濃度。用SPSS16.0統(tǒng)計軟件對... 

【文章來源】：浙江大學浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

H隊軸

Ak燈PKB為Foxo的上游基因，研究發(fā)現(xiàn)Ak燈PKB的磷酸化在Foxo家族轉錄因子的調控中的重要作用。Ak燈PKB活化后可以移位到核內，磷酸化FoxO家族轉錄因子，F(xiàn)oxo磷酸化后出核，轉錄活性降低(見圖4)。其中，F(xiàn)KHRLI蛋白的分子量約為97KD，在腦的各個部位都有表達，其活性受Ser253、Ser3巧以及Thr犯磷酸化的調節(jié)[30】。研究認為Foxo家族的靶基因產物可能是胞外配體，如FaS配體、Trail和TNFRI結合死亡域蛋白 (TRADD);促凋亡因子如Bim和Bcl一6等�；罨腁kt與FoxO結合降低了其轉錄水平從而減少細胞的凋亡[3’一32]。!11…!.!!:!…111.一!燮烈《，》入川卜曲洶洲側知黔.挑容圖4:Akt/FKHRLI信號通路(徹 ivooldbartetal，2003)臨床死后腦研究發(fā)現(xiàn)抑郁癥患者腦中FKHRLI的上流分子Akt的活性偏低[33];我們新近的研究也發(fā)現(xiàn)慢性束縛應激能誘導大鼠海馬Ak燈FKHRLI信號通路活性的改變[34]，但具體的機理以及應激時海馬Ak燈FKHRLI信號通路活性改變的生物學意義尚不明確。因此，明確Ak燈FKHRLI信號通路在個體應激反應中的作用是一個圣待研究的課題。

急性心理應激ACTH測定值單因素方差分析結果etweenGrouPsithinGrouPsOla!SUmof旦創(chuàng)匹絲旦呈3624.81413434.27317059.087業(yè)旦衛(wèi)衛(wèi)型旦魚724.963584.099F1.2412328性心理應激P一Akt與Akt的活性改變理應激的大鼠應激前后及應激后不同時間點P一Akt/Akt比值無統(tǒng)急性心理應激P一從t與Akt的表達對照)、0(應激后即刻)、smin(應激后smin)、15min(應激后15min、60min(應激后60min)

【參考文獻】：
期刊論文
[1]慢性束縛應激對大鼠腦內Fas、FasL含量的影響[J]. 朱婉兒,張蓉,胡長春,董逢泉,吳麗霞,陳芝蕓.  心理學報. 2008(06)
[2]慢性應激對大鼠海馬Akt/FKHRL1信號通路活性的影響[J]. 朱婉兒,胡長春,謝文婷,吳麗霞,陳芝蕓,梅垣宏行.  心理學報. 2007(04)



本文編號：2993847