骨骼肌是人體最豐富的組織,對于生命活動,尤其是運(yùn)動的維持至關(guān)重要。但成年人體內(nèi)可再生的骨骼肌干細(xì)胞數(shù)量極其有限,在肌肉發(fā)生比較大的損傷或疾病時,不足以補(bǔ)充受損的肌肉細(xì)胞。胚胎干細(xì)胞一直是組織和器官再生領(lǐng)域的研究熱點,在體外可分化為骨骼肌用于再生醫(yī)學(xué),但其分化的調(diào)控機(jī)制尚不明確。因此,研究胚胎干細(xì)胞骨骼肌分化的作用和機(jī)制,可為骨骼肌疾病的細(xì)胞替代療法和藥物篩選提供途徑。研究發(fā)現(xiàn)Rbm24在骨骼肌中高表達(dá),在小鼠胚胎干細(xì)胞分化過程中,Rbm24升高伴隨著骨骼肌標(biāo)記基因的上調(diào)。我們利用Cre-Loxp可誘導(dǎo)調(diào)控系統(tǒng),在小鼠胚胎干細(xì)胞骨骼肌分化過程中誘導(dǎo)Rbm24過表達(dá),探索Rbm24在骨骼肌分化過程中的作用。我們利用懸滴法形成擬胚體誘導(dǎo)胚胎干細(xì)胞體外分化,通過實時熒光定量RCR檢測Rbm24與骨骼肌特異性標(biāo)志物的表達(dá)水平。結(jié)果顯示,在分化過程中誘導(dǎo)Rbm24過表達(dá),與對照組相比,Pax3、Pax7和MyoG的mRNA表達(dá)量明顯增加。免疫熒光染色結(jié)果顯示,過表達(dá)Rbm24后,MyoG和MyHC的蛋白表達(dá)也顯著上升。并且在分化第25天,觀察到Rbm24過表達(dá)組出現(xiàn)骨骼肌樣細(xì)胞持續(xù)性抽動。表明Rb... 

【文章來源】：廈門大學(xué)福建省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２體節(jié)形成早期（ｉ）和體節(jié)形成末期（ｉｉ）胚胎橫截面示意圖??Ｆｉｇ．２?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｏｆ?ｔｒａｎｓｖｅｒｓｅ?ｓｅｃｔｉｏｎｓ?ｔｌｉｒｏｕｇｈ?ｔｈｅ?ｅｍｂｒｙｏ?ａｔ?ｅａｒｌｙ?（ｉ）?ａｎｄ?ｌａｔｅ?（ｉｉ）??

使用單層分化方法，通過調(diào)節(jié)信號通路途徑誘導(dǎo)軸旁中胚層的分化。??Ｃｈａｌ等人通過在分化的不同時間點添加不同信號通路激活劑或抑制劑誘導(dǎo)??胚胎干細(xì)胞向骨骼肌細(xì)胞分化。如圖３，加入Ｗｎｔ途徑激活劑Ｒｓｐｏ３或ＧＳＫ３ｐ??抑制劑?ＣＨＩＲＯＮ９９０２１?促進(jìn)?ｍＥＳＣｓ?向?ＰＳＭ（ｐｒｏｓｏｍｉｔｉｃ?ｍｅｓｏｄｅｒｍ）分化，之后加??入生長因子ｂＦＧＦ、ＨＧＦ、ＩＧＦ促進(jìn)ＰＳＭ向Ｐａｘ７＋祖細(xì)胞、肌細(xì)胞和肌管分化ｗ。??Ｒｓｐｏ３／ＣＨＩＲ?Ｒｓｐ〇３／ＣＨＩＲ?ｂＦＧＦ，?ＨＧＦ?ｂＦＧＦ，?ＨＧＦ??Ｉｎ?ｖｉｔｒｏ?廣一ＬＤＮ?，?＾?ＬＤＮ?廣—－Ｖ．?ＩＧＦ?ＩＧＦ??ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ??？?ＣｔＪ??？??Ｍｏｕｓｅ?Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ?Ｍｓｇｎｌ＊?Ｐａｘ３＊?ａＰＳＭ?Ｐａｘ７＊?ＭｙｏＧ１?Ｍｙｏｃｙｔｅ??Ｓｔｅｍ?Ｃｅｌｌ?ｐＰＳＭ?Ｃｅｌｌ?Ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ?Ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ?ＭｙＨＣ?Ｍｙｏｔｕｂｅ??Ｄａｙ?０?Ｄａｙ?４?Ｄａｙ?６?Ｄａｙ?９?Ｄａｙ?２５??圖３體外使用生長因子和小分子促進(jìn)ｍＥＳＣｓ骨骼肌分化的示意圖??Ｆｉｇ．３?Ｔｈｅ?ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ?ｉｎ?ｖｉｔｒｏ?ｃｅｌｌｓ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ?ｆｒｏｍ?ｍＥＳＣｓ?ｕｓｉｎｇ??ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌｌｙ?ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ?ｇｒｏｗｔｈ?ｆａｃｔｏｒｓ?ａｎｄ?ｓｍａｌｌ?ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ?ａｒｅ?ｓｈｏｗｎ．??ｍＥＳＣｓ在不同條件下可分化為三胚層所有不同的細(xì)胞類型，包括骨骼肌。??然而

?第一章前言???ＲＢＮＳ（ＲＮＡ?Ｂｉｎｄ－ｎ－Ｓｅｑ）等，以?ＲＮＡ?為核心的研究技術(shù)包括?ＣｈＩＲＰ（Ｃｈｒｏｍａｔｉｎ??ｉｓｏｌａｔｉｏｎ?ｂｙ?ＲＮＡ?ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ）和?ＣＨＡＲＴ（Ｃａｐｔｕｒｅ?ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ＲＮＡ??ｔａｒｇｅｔｓ）等?〇??１．３．２?ＲＮＡ結(jié)合蛋白功能的多樣性??ＲＢＰｓ在ＲＮＡ生物過程的每一個方面都發(fā)揮功能，從ＲＮＡ的轉(zhuǎn)錄，??ｐｒｅ－ｍＲＮＡ的剪切，多腺苷酸化，到ＲＮＡ的修飾，轉(zhuǎn)運(yùn)，定位，轉(zhuǎn)錄和翻轉(zhuǎn)。??ＲＢＰ不僅影響ＲＮＡ的每一個生物過程，而且為這些過程間提供了一個很好連??接的作用０＿＇２７］，這些錯綜復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)的正常運(yùn)行對于轉(zhuǎn)錄后事件的協(xié)調(diào)是必不可??少的。??


本文編號：2993282