研究目的：以腮腺炎減毒活疫苗病毒作為溶瘤病毒,研究其對(duì)腫瘤的抑制效果,分析其抗腫瘤的作用機(jī)制,為腫瘤治療探索新思路。研究方法：本文采用腮腺炎減毒活疫苗病毒（杭州市疾病控制中心）、小鼠胃癌細(xì)胞系（MFC）和人腎母細(xì)胞瘤細(xì)胞系（G401）開展研究。實(shí)驗(yàn)主要分為3組,分別是腮腺炎減毒活疫苗病毒原液組、腮腺炎病毒原液*10-1組（即病毒滴度為原液組的1/10）和無病毒的對(duì)照組。1.采用Vero細(xì)胞體外擴(kuò)增病毒,收集腮腺炎減毒活疫苗病毒；利用空斑形成單位PFU法,測(cè)定病毒滴度。2.96孔細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)接種細(xì)胞,采用CCK-8檢測(cè)腮腺炎減毒活疫苗病毒原液組對(duì)MFC、G401腫瘤細(xì)胞的抑制作用。3.通過FITC Annexin V/PI-流式細(xì)胞方法,在腮腺炎減毒活疫苗病毒誘導(dǎo)下,連續(xù)3天觀察MFC、G401腫瘤細(xì)胞的凋亡率變化。4.獲取腮腺炎減毒活疫苗病毒感染3天后的MFC、G401腫瘤細(xì)胞,提取DNA全基因,進(jìn)行DNA電泳,明確DNA Ladder凋亡小體的形成。5.提取腮腺炎病毒感染3天后的MFC、G401腫瘤細(xì)胞蛋白,進(jìn)行Western Blot蛋白電泳,檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白P62、LC3（LC3... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
致謝
中文摘要
Abstract
英文縮寫詞與中英文索引
目錄
引言
器材與試劑
    1、材料和試劑
    2、儀器設(shè)備
    3、試劑配制
實(shí)驗(yàn)方法
    1、細(xì)胞培養(yǎng)、傳代、凍存和復(fù)蘇
    2、腮腺炎減毒活疫苗病毒擴(kuò)增、純化及滴度檢測(cè)
    3、CCK-8檢測(cè)腮腺炎減毒活疫苗病毒對(duì)G401、MFC腫瘤細(xì)胞的抑制作用
    4、FITC ANNEXIN V/PI檢測(cè)細(xì)胞凋亡率
    5、DNA提取,進(jìn)行電泳DNA LADDER
    6、WESTERN BLOT蛋白電泳
    7、建立腫瘤動(dòng)物模型與溶瘤治療
    8、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    1、腮腺炎減毒活疫苗病毒PFU滴度檢測(cè)
    2、腮腺炎減毒活疫苗病毒對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用
    3、腫瘤細(xì)胞感染腮腺炎減毒活疫苗病毒后的細(xì)胞學(xué)變化
    4、腮腺炎減毒活疫苗病毒誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡
    5、腮腺炎減毒活疫苗病毒誘導(dǎo)產(chǎn)生DNA LADDER
    6、腮腺炎減毒活疫苗病毒誘導(dǎo)腎母細(xì)胞瘤細(xì)胞自噬
    7、腮腺炎減毒活疫苗病毒對(duì)荷瘤鼠胃癌的治療作用
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：2980077