目的:構建乙腦病毒野毒株（SA14）及疫苗株/野毒株嵌合病毒株（SA14-14-2/SA14）感染性克隆,拯救病毒,比較重組乙腦野毒株和嵌合病毒株對小鼠的神經毒力及神經侵襲力,判斷prM/E在乙腦病毒毒力中的作用。方法:采用分子克隆技術分別構建乙腦病毒野毒株（SA14）、嵌合病毒株（SA14-14-2/SA14）感染性克�。ㄈLcDNA質粒）,并以此為模板,體外轉錄得到RNA,將RNA電轉染導入BHK21細胞進行病毒拯救,用噬斑形成實驗、間接免疫熒光技術及測序鑒定拯救病毒,比較重組乙腦野毒株及嵌合病毒株生長特點,并用重組乙腦野毒株和嵌合病毒株分別腦內和皮下接種昆明小鼠,比較重組乙腦野毒株和嵌合病毒株對小鼠神經毒力及神經侵襲力。結果:酶切鑒定表明感染性克隆構建成功,用間接免疫熒光技術檢測到拯救病毒包膜蛋白表達,噬斑形成實驗發(fā)現:野毒株噬斑直徑最大,其次是嵌合病毒株,疫苗株噬斑直徑最小。測序結果表明:拯救病毒與理論相符合。生長曲線表明嵌合株病毒在48h達到高峰后迅速下降,而疫苗株病毒和野毒株病毒均在60h達到高峰,整個觀察期,野毒株病毒的滴度高于嵌合病毒和疫苗株病毒滴度。神經毒力研究發(fā)現:... 

【文章來源】：川北醫(yī)學院四川省

【文章頁數】：57 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

嵌合病毒JEVSA14-14-2/SA14感染性克隆構建示意圖

圖 2 乙腦病毒株 rJEV SA14 感染性克隆構建示意圖Fig2. Schematic diagram of the construction of infectious clone of rJEV SA14

圖 3 pACNR-JEV SA14-14-2/SA14(5')酶切鑒定alysis of the plasmid pACNR-JEV SA14-14-2/SA14(5') with restriction enzymeA 分子量標準（ DL2000 ）； 1 ： pACNR-JEV SA14-14-2/SA14(5') ； 2 ： pA

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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[2]以乙腦病毒SA14-14-2為載體構建乙腦/登革2型嵌合病毒的研究[D]. 韋艷.中國疾病預防控制中心 2009
[3]乙腦病毒的分離鑒定和全長基因克隆的研究[D]. 湯德元.四川農業(yè)大學 2004



本文編號：2950811