c-Abl （cellular Abelson gene product, c-Abl）是非受體酪氨酸激酶超家族Abelson的成員,在細(xì)胞生長和生存的許多重要信號通路,如細(xì)胞骨架重塑、細(xì)胞遷移和粘附、受體內(nèi)吞作用、自噬、DNA損傷反應(yīng)和細(xì)胞凋亡、促進(jìn)自噬體進(jìn)入溶酶體以及溶酶體組件的正常工作等方面都有重要作用。受到氧化壓力刺激,c-Abl進(jìn)入線粒體可以介導(dǎo)線粒體功能損傷和細(xì)胞死亡。正常情況下,細(xì)胞內(nèi)c-Abl活性比較低,電離輻射或氧化應(yīng)激時被激活。由于染色體易位形成BCR-Abl融合基因,其編碼的BCR-ABL融合蛋白呈組成性激活狀態(tài),是導(dǎo)致慢性粒細(xì)胞性白血病（CML）的主要原因。c-Abl的抑制劑STI571（又稱伊馬替尼,格列衛(wèi)）是90年代開發(fā)的酪氨酸激酶抑制劑類藥物,是全世界第一個靶向小分子藥物,在BCR-Abl陽性急、慢性白血病的治療中發(fā)揮了重要作用。持續(xù)使用該藥的病人,其預(yù)期壽命已與正常人群沒有顯著區(qū)別。有文獻(xiàn)中已經(jīng)報道STI571可以升高細(xì)胞的活性氧水平,同時將表皮生長因子抑制劑聯(lián)合STI571用藥可協(xié)同促進(jìn)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞凋亡。線粒體是真核細(xì)胞氧化產(chǎn)能的重要場所,它通過內(nèi)... 

【文章來源】：安徽大學(xué)安徽省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：45 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
第一章 緒論
    1.1 c-Abl和c-Abl抑制劑
    1.2 線粒體和活性氧族
    1.3 線粒體自噬（mitophagy）
    1.4 AIF
    1.5 本課題擬解決的科學(xué)問題
第二章 材料與方法
    2.1 分子克隆
        2.1.1 試劑
        2.1.2 培養(yǎng)基
        2.1.3 定點突變質(zhì)粒構(gòu)建、EGFP熒光質(zhì)粒構(gòu)建
    2.2 細(xì)胞實驗
        2.2.1 試劑及配方
        2.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)與傳代
        2.2.3 免疫印記（內(nèi)源性磷酸化/外源性磷酸化）
        2.2.4 質(zhì)譜鑒定磷酸化位點
        2.2.5 免疫熒光檢測線粒體損傷和AIF在線粒體上的定位
        2.2.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測ROS
        2.2.7 AIF敲低細(xì)胞系的建立
第三章 結(jié)果
    3.1 AIF酪氨酸磷酸化修飾位點鑒定
        3.1.1 質(zhì)譜檢測AIF酪氨酸磷酸化修飾位點
        3.1.2 免疫印記驗證AIF的酪氨酸磷酸化修飾位點
    3.2 AIF敲低的A549細(xì)胞系線粒體呈現(xiàn)片段化損傷
        3.2.1 AIF敲低細(xì)胞系的構(gòu)建結(jié)果
        3.2.2 AIF RNAi對A549細(xì)胞線粒體形態(tài)的影響
    3.3 c-Abl抑制劑可能通過AIF介導(dǎo)的線粒體的損傷
        3.3.1 c-Abl抑制劑對線粒體的損傷有時間和劑量依賴性,線粒體內(nèi)膜蛋白AIF與線粒體共定位異常
        3.3.2 線粒體錨定型AIF緩解c-Abl抑制劑對線粒體的損傷
    3.4 AIF敲低對c-Abl抑制劑誘導(dǎo)A549細(xì)胞ROS水平升高的影響
    3.5 c-Abl特異性抑制劑尼洛替尼可以誘導(dǎo)線粒體自噬并且抑制自噬體的清除
    3.6 討論
        3.6.1 c-Abl抑制劑STI571通過改變AIF的定位、升高ROS水平介導(dǎo)線粒體損傷
        3.6.2 c-Abl抑制劑誘導(dǎo)線粒體自噬,抑制自噬流
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：2935464