目的利用細(xì)胞工廠,探討F基因型腮腺炎病毒SP-A株在KMB_(17)細(xì)胞上的增殖特性,為腮腺炎疫苗的研制提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。方法分別以體積分?jǐn)?shù)為10%、8%和5%的血清濃度將細(xì)胞培養(yǎng)至單層后,觀察病毒接種后細(xì)胞病變情況,初步確定最低血清含量后;在不含血清培養(yǎng)基條件下,按照不同接種感染復(fù)數(shù)(multiplicity of infection, MOI)接種細(xì)胞,確定病毒增殖峰值后,進(jìn)一步觀察不同吸附條件對(duì)病毒增殖的影響;同時(shí)進(jìn)行熒光實(shí)時(shí)定量PCR,驗(yàn)證病毒增殖變化。結(jié)果在體積分?jǐn)?shù)為5%的血清條件下,細(xì)胞可生長(zhǎng)成致密單層;高M(jìn)OI(0.500)感染細(xì)胞后,在4～5 d內(nèi)進(jìn)入增殖高峰,中MOI(0.050)、低MOI(0.005)感染細(xì)胞后,在5～6 d進(jìn)入增殖高峰,維持48 h后,呈現(xiàn)緩慢下降趨勢(shì);在比較37℃吸附試驗(yàn)中,非吸附組病毒增殖高峰明顯遲于吸附組,熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)結(jié)果顯示在病毒感染細(xì)胞6 d時(shí)病毒載量達(dá)到峰值。結(jié)論 5%新生牛血清即可獲得生長(zhǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞,MOI對(duì)腮腺炎病毒在KMB_(17)細(xì)胞株中的增殖有較大的影響,當(dāng)使用適宜范圍的MOI(0.01～0.02),在非吸附的條件下,腮腺炎病毒SP-A株在KMB_(17)株中能夠良好地增殖,在病毒培養(yǎng)至7～9 d可獲得高滴度的病毒收獲液。
【部分圖文】：

在體積分?jǐn)?shù)分別為10%和8%血清條件下細(xì)胞生長(zhǎng)成致密單層時(shí)間較快,36～48 h已經(jīng)形成細(xì)胞單層,60～64 h形成致密單層;在5%血清條件下,細(xì)胞在48～54 h細(xì)胞形成單層,68～72 h細(xì)胞形成致密單層。細(xì)胞形態(tài)呈梭狀特征,界限清晰,排列整齊,細(xì)胞立體感和折光性均較好,見圖1。在體積分?jǐn)?shù)5%血清條件下,MOI為0.200接種細(xì)胞時(shí),在感染3～5 d出現(xiàn)40%～50%圓縮,但基本無(wú)細(xì)胞脫落。至7 d時(shí),細(xì)胞圓縮現(xiàn)象大幅度增加,并有較多的細(xì)胞脫落。當(dāng)MOI從0.020逐漸減少到0.002時(shí),細(xì)胞感染變化逐漸減弱,培養(yǎng)至3～5 d時(shí)有20%～30%細(xì)胞脫落;至5～7 d時(shí)細(xì)胞脫落40%～50%;至8～10 d時(shí)細(xì)胞脫落達(dá)到70%～80%,培養(yǎng)液上清中有大量死細(xì)胞,見圖2。

使用體積分?jǐn)?shù)為10%的血清作為培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞后,在無(wú)血清培養(yǎng)維持條件下較早的出現(xiàn)病毒增殖高峰,時(shí)間為感染后3～5 d,同樣在無(wú)血清培養(yǎng)維持條件下使用8%和5%血清培養(yǎng)細(xì)胞組,出現(xiàn)病毒增殖時(shí)間相近,大致在感染細(xì)胞后5～7 d出現(xiàn)病毒增殖高峰。高M(jìn)OI(0.500)感染細(xì)胞后,能在4～5 d病毒進(jìn)入增殖高峰,并于7 d后以較快速度呈下降趨勢(shì)。中(0.050)、低(0.005)MOI感染細(xì)胞后,在5～6 d進(jìn)入增殖高峰,維持48 h后,呈現(xiàn)緩慢下降趨勢(shì),見圖3。圖3 不同血清含量培養(yǎng)細(xì)胞接種不同MOI后病毒增殖變化

不同血清含量培養(yǎng)細(xì)胞接種不同MOI后病毒增殖變化
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