射精是雄性性行為時將精液射出的反射性動作,是維持人類以及其他哺乳動物性和諧、生命得以延續(xù)的最基本的生命現(xiàn)象。就人類而言,射精被認為是生物界最神奇的生命現(xiàn)象。早泄和射精遲緩癥等射精功能障礙,不僅影響生育,還影響性生活質量。因此,針對動物射精過程中腦神經調控分子機理的研究,不僅能為認識動物射精的生理規(guī)律開辟新的思路,而且將為臨床研究提供新的科學依據(jù)。本論文通過雄性大鼠射精過程中腦神經轉錄組的測序,尋找并挖掘與射精相關的基因,為探索大鼠射精過程中腦神經調節(jié)的分子機理提供科學依據(jù)。其主要研究結果如下:1.建立了一個方法簡單、方便,適合并能保證本課題相關研究可行的雄鼠交配實驗模型。2.開展了不同劑量的8-OH-DPAT和達泊西汀對雄鼠射精的影響的研究,結果表明,0.5mg/kg8-OH-DPAT能促進雄鼠射精;60mg/kg達泊西汀則顯示延緩雄鼠射精的現(xiàn)象。因此,我們選擇兩個實驗劑量開展下面的轉錄組研究。3.應用Solexa高通量測序技術對雄鼠射精過程進行轉錄組測序(6個轉錄組:對照組CK,插入第四次組CR4、射精組EJ,8-OH-DAT給藥射精組DPAT,達泊西汀給藥組DAP和射精后1min組PEI1),通過轉錄組之間相互比對以及差異基因統(tǒng)計,主要結果表明,在CR4/CK有42個基因上調,97個基因下調;EJ/CK中有66個基因上調,191個基因下調;DPAT/CK中,有91個基因上調,258個基因下調;DAP/CK中有52個基因上調,155個基因下調;PEI1/CK中,有39個基因上調,91個基因下調;EJ/CR4中,有112個基因上調,191個基因下調;PEI1/EJ中,有128個基因上調,194個基因下調;DPAT/EJ中,有264個基因上調,487個基因下調;DAP/EJ中,有162個基因上調,211個基因下調。4.通過對其差異基因的表達水平變化規(guī)律進行分析,我們推測Drd4、Tph1、Chrna3、Chrnb4、Oxt、Prl、Avp、Pomc、Gabra6、Gabrr1 和 Cacna1f共 11 個基因可能參與射精調節(jié)的生物行為。另外,Drd1和Slc6a3可能涉及8-OH-DPAT促進射精的分子機制,而Drd4涉及達泊西汀延緩射精的分子機制。5.利用qRT-PCR技術對這11個基因進行檢測驗證,結果表明:11個基因的相對表達量的表達變化趨勢與轉錄組里的基本一致。這表明本實驗的轉錄組數(shù)據(jù)是可靠準確的。6.綜合分析本實驗獲得的大量雄鼠射精關聯(lián)基因瞬時表達信息,我們假設:"接受外界刺激信號的中樞神經,通過啟動包括神經遞質受體、離子通道、內腓肽前體和肽類激素等射精調節(jié)相關基因的表達,并通過翻譯相關功能蛋白或酶,直接或間接地、正反饋或者負反饋式地作用于中樞神經,形成腦神經調節(jié)回路并完成射對精過程的調節(jié)"。7.我們通過生物信息學對11個射精相關基因進行同源性分析,發(fā)現(xiàn)Tph1、Chrna3、Oxt、Gabra6、Gabrr1 和 Cacnalf 較為保守,而 Drd4、Chrnb4、prl、Avp 和 Pomc 保守較低。通過平均同源性分析,他們在人類中可能進化速度較快。本論文首次利用Solexa高通量測序技術對大鼠射精模型進行了轉錄組研究,獲得了大量雄鼠射精相關的基因信息,篩選并通過qRT-PCR技術對其中11個相關基因進行證實,這為射精分子機制的研究打下了堅實基礎。
【學位單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：博士
【學位年份】：2014
【中圖分類】：R339.2
【部分圖文】：

ｇ?ｈ??圖１雄鼠交配過程??ａ：雄鼠嗅雌鼠肛門生殖器；ｂ：騎跨；ｃ：插入；ｄ：舔陰；ｅ：射精；ｆ、ｇ：雄精后前肢慢慢松開過程；ｈ：射精后不應期?．??四討論??目前，國內外研究雄性性行為的方法多樣各異。在雄鼠的性行為的研究中，雌發(fā)情尤其重要，國內很多學者對雌鼠每天進行陰道涂片，檢查處于發(fā)情的雌鼠用來鼠交配［７］。但是這傳統(tǒng)方法顯然費時費力，很難保證同一時間內檢測到多只雌鼠發(fā)這不僅降低實驗的效率，并且使得實驗準確性較差。由此，田二坡等人在國內外研基礎上，通過雄鼠交配實驗提出了更便捷的雌鼠發(fā)情方法一激素誘導雌鼠發(fā)情。我利用此誘導雌鼠發(fā)情方法的基礎上，發(fā)現(xiàn)在雌二醇和黃體酮分別和香麻油混合后，６０°Ｃ水浴恒溫ｌｈ，雌鼠的發(fā)情更加良好，使得雄鼠的交配行為更好的進行。這因為６０水浴恒溫ｌｈ能夠更能夠充分溶解雌二醇和黃體酮。激素誘導雌鼠發(fā)情方法簡單，作，使我們同一時間內同時獲得一批發(fā)情良好的雌鼠，且雄鼠的交配成功率也有較

圖ｉ轉錄組測序步驟??２．５．２轉錄組信息分析流程??圖２為信息分析流程圖：由Ｉｌｌｕｍｉｎａ?ＨｉＳｅｑＴＭ?２０００測序所得的數(shù)據(jù)稱為ｒａｗ?ｒｅａｄｓ??或ｍｗｄａｔａ，隨后要對ｍｗｒｅａｄｓ進行質控（ＱＣ），以確定測序數(shù)據(jù)是否適用于后續(xù)分析。??３８??

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