目的表達(dá)高純度的抗苗勒管激素蛋白,以該蛋白作為抗原制備單克隆抗體,并鑒定抗體亞型,為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)優(yōu)質(zhì)的抗苗勒管激素診斷試劑盒做技術(shù)儲(chǔ)備。方法在表達(dá)載體pET-28a(+)質(zhì)粒中接入經(jīng)密碼子優(yōu)化的抗苗勒管激素基因(AMH)片段,轉(zhuǎn)化于BL21細(xì)菌中,異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)重組蛋白大量表達(dá),對(duì)上清中可溶性蛋白進(jìn)行純化。使用SDS-PAGE分析純化蛋白的純度。經(jīng)純化的抗原蛋白3次皮下免疫小鼠,挑選產(chǎn)生高效價(jià)的抗體的小鼠,取其脾細(xì)胞,制備懸液。經(jīng)細(xì)胞雜交技術(shù)與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合,篩選能穩(wěn)定持久分泌抗AMH抗體的雜交瘤細(xì)胞株,并制備腹水抗體。通過(guò)親和層析技術(shù)、BCA蛋白檢測(cè)方法等測(cè)定手段,純化抗體、檢測(cè)抗體濃度。結(jié)果篩選到2株能持久分泌抗AMH蛋白單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株,分別為克隆細(xì)胞株3F6和4E7,分泌抗體均為IgG1亞型。結(jié)論篩選出穩(wěn)定分泌高純度的抗苗勒管激素抗體的2株雜交瘤細(xì)胞,并制備單克隆抗體。下一步將其應(yīng)用于AMH檢測(cè)試劑盒的開(kāi)發(fā)。
【部分圖文】：

經(jīng)過(guò)37℃誘導(dǎo)表達(dá)4 h和25℃誘導(dǎo)表達(dá)過(guò)液，菌體收集破碎，SDS-PAGE分析（圖1）發(fā)現(xiàn)，AMH蛋白主要在包涵體中表達(dá)。37℃條件下，表達(dá)量更高且更省時(shí)，所以以37℃誘導(dǎo)表達(dá)4h，進(jìn)行大量表達(dá)。經(jīng)SDS-PAGE膠分析，NI-NTA親和層析柱純化后的AMH蛋白純度達(dá)85%以上，蛋白分子量大約40 k左右。見(jiàn)圖2。圖2 SDS-PAGE分析AMH純化蛋白

SDS-PAGE分析AMH純化蛋白

抗體亞型鑒定
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 蘇比努爾·買買提（Subinur.Maimaiti）;AMH及性激素對(duì)卵巢儲(chǔ)備功能的預(yù)測(cè)價(jià)值和人工周期治療對(duì)卵巢儲(chǔ)備功能的療效[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2018年

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 晏三華;慢病毒介導(dǎo)Bcl-2基因在大鼠體內(nèi)的表達(dá)及對(duì)化療后卵巢功能影響的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2009年

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 宋凱;葉賽;周佳菁;彭海林;王升年;衛(wèi)玲;肖華勝;趙國(guó)屏;張慶華;;蛋白質(zhì)芯片技術(shù)應(yīng)用于高通量單克隆抗體制備研究[J];生物工程學(xué)報(bào);2007年06期

2 李川江,林喬;NIH小鼠在單克隆抗體制備中的應(yīng)用[J];中國(guó)生物制品學(xué)雜志;1999年01期

3 閻明博;;“單克隆抗體制備過(guò)程及其應(yīng)用”解讀[J];中學(xué)生物教學(xué);2010年07期

4 邵碧英;抗體制備方法的研究進(jìn)展[J];植物檢疫;2003年05期

5 顧文波;;單克隆抗體制備過(guò)程中的篩選問(wèn)題[J];中學(xué)生物教學(xué);2011年10期

6 曾昭偉;王學(xué)謙;常艷敏;蔡迪婭;;妊娠相關(guān)血漿蛋白A重組抗原表位分析及抗體制備[J];山東醫(yī)藥;2013年13期

7 徐偉文;徐洲穩(wěn);郝文波;姚小艷;王穗海;李明;;聯(lián)合免疫在高通量單克隆抗體制備中的初步評(píng)價(jià)與分析[J];熱帶醫(yī)學(xué)雜志;2007年12期

8 許祖德，張?jiān)露�，陳忠年，張秀榮，王新禾;V型膠原的提取、純化及其抗體制備[J];上海醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1994年01期

9 惠開(kāi)元;高向東;徐晨;;單克隆抗體制備的細(xì)胞工程學(xué)研究進(jìn)展[J];中國(guó)生物工程雜志;2012年02期

10 余易展;羊婷婷;劉培;王念超;盧彥;黃亞紅;沈萍萍;;抗人胱抑素C單克隆抗體制備及免疫檢測(cè)體系建立[J];衛(wèi)生研究;2017年04期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 田梅;晚期氧化蛋白產(chǎn)物單克隆抗體制備的實(shí)驗(yàn)及應(yīng)用研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2009年

2 張亦婷;EGFRvⅢ靶向單克隆抗體CH12致食蟹猴特異性血小板減少的分子機(jī)制研究[D];中國(guó)科學(xué)院大學(xué)(中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所);2019年

3 沈永才;人蛋白C的研制及其相關(guān)研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2004年

4 樊一筍;兩株功能阻斷型CD154單克隆抗體的生物學(xué)特性及其應(yīng)用研究[D];蘇州大學(xué);2004年

5 趙麗;抗牛PrP多肽單克隆抗體的制備及其在牛PrP檢測(cè)中的應(yīng)用[D];山東大學(xué);2004年

6 溫新宇;人CD38分子的克隆表達(dá)、單克隆抗體的制備及其功能的初步研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2005年

7 王玉剛;基于計(jì)算機(jī)輔助分子設(shè)計(jì)的抗CD20單克隆抗體的改造[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2005年

8 余自強(qiáng);抗血小板膠原受體糖蛋白VI單克隆抗體的制備和功能研究[D];蘇州大學(xué);2005年

9 游曉華;腦鈉肽單克隆抗體的制備及初步臨床應(yīng)用研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2006年

10 張小萍;SARS病毒S蛋白特異性單克隆抗體制備和抗原識(shí)別位點(diǎn)鑒定[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2005年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 馬永超;低密度脂蛋白受體蛋白的表達(dá)、純化及抗體制備[D];武漢大學(xué);2017年

2 湯蕾;NY-ESO-1的原核表達(dá)、抗體制備及其鑒定[D];河北醫(yī)科大學(xué);2014年

3 安星蘭;人肌紅蛋白基因合成、原核表達(dá)及單克隆抗體制備[D];東北林業(yè)大學(xué);2012年

4 姬凱;人ABHD16A抗體制備與乙型腦炎病毒可視化快速檢測(cè)方法的建立[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

5 吳曉亮;腫瘤源性早孕因子單克隆抗體制備及鑒定[D];廣州醫(yī)學(xué)院;2011年

6 秦巧玲;志賀氏菌多克隆抗體制備及ELISA檢測(cè)方法的建立[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

7 李劍;抗TRPM2兔單克隆抗體制備及初步鑒定[D];浙江大學(xué);2016年

8 何昆;eIF-5A基因釣取、蛋白質(zhì)表達(dá)、抗體制備及其功能的初步研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2003年

9 韓小東;MASP-2 CUB1和CUB2功能區(qū)蛋白抗體制備及初步鑒定[D];河北北方學(xué)院;2015年

10 王偉;超敏C反應(yīng)蛋白單克隆抗體制備及其電化學(xué)免疫傳感器的初步研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

本文編號(hào)：2848729