研究背景中醫(yī)氣血理論認(rèn)為,氣血是人體進(jìn)行生命活動的基礎(chǔ),“氣為血之帥,血為氣之母”,氣血失和又是很多疾病變化的根本,氣虛血瘀證是氣血失和最常見一種類型。氣虛運(yùn)血無力而導(dǎo)致血液瘀阻,普遍存在于威脅人類健康的三大疾病中,是疾病發(fā)生發(fā)展過程中一個重要的病理基礎(chǔ),為目前中醫(yī)藥氣血理論研究的熱點(diǎn)。當(dāng)出現(xiàn)氣虛血瘀證時,機(jī)體血液系統(tǒng)出現(xiàn)高凝狀態(tài),微循環(huán)系統(tǒng)作為循環(huán)系統(tǒng)最基本單位,也可能發(fā)生變化,以往研究對氣虛血瘀證形成過程中的微循環(huán)障礙關(guān)注較少,但其所導(dǎo)致的功能紊亂,在中醫(yī)學(xué)也屬“血瘀”范疇,是很多疾病發(fā)生發(fā)展中不容忽視的一個方面�；谂R床病理的動物模型構(gòu)建是中醫(yī)基礎(chǔ)理論研究的重點(diǎn)和難點(diǎn),目前對于氣虛血瘀證動物模型的研究已經(jīng)取得了一些進(jìn)展,大多采用“饑”、“驚”、“勞”的思路。本實(shí)驗(yàn)室在前期研究基礎(chǔ)上最終采用睡眠剝奪法建立氣虛血瘀證模型,前期基礎(chǔ)研究表明,睡眠剝奪法建立的氣虛血瘀證大鼠基本符合中醫(yī)臨床氣虛血瘀證的主要特征,包括機(jī)體血液黏度增高、免疫力降低、血小板功能異常等,但是缺乏對動物模型的微循環(huán)狀態(tài)評價研究。本課題在實(shí)驗(yàn)室前期研究的基礎(chǔ)上,對該模型的微循環(huán)狀態(tài)進(jìn)行評價,為中醫(yī)證候動物模型的研究提供實(shí)驗(yàn)證據(jù),同時為氣血理論的研究提供可靠依據(jù)。目的觀察氣虛血瘀證模型大鼠微循環(huán)狀態(tài)病理變化,并構(gòu)建其微循環(huán)狀態(tài)評價體系,為證候模型及中醫(yī)藥功效研究提供可靠方法。方法1)實(shí)驗(yàn)動物分為正常組和模型組,通過水環(huán)境小平臺每天固定時間站立進(jìn)行連續(xù)六周睡眠剝奪建立大鼠氣虛血瘀證模型。2)體征觀察,包括:毛發(fā)、毛色、神態(tài)、體型、精神狀態(tài)、體重以及二便等,每周一次,在造模第4w、6w采用智能無創(chuàng)血壓儀測量大鼠血壓。3)體表微循環(huán)觀察:在造模第2w、4w、6w分別收集正常及模型大鼠舌像、脈象、足底、耳廓等信息,用單反相機(jī)分別采集正常和模型大鼠舌和足底圖像,通過標(biāo)準(zhǔn)比色卡校對,進(jìn)行色彩飽和度分析;通過無創(chuàng)脈搏儀檢測大鼠脈搏幅度;激光多普勒血流儀檢測大鼠耳廓和足底體表血流灌注量情況。4)腸系膜微循環(huán)觀察:造模6w后,各組大鼠開始進(jìn)行腸系膜微循環(huán)觀察,實(shí)驗(yàn)前12h禁食,麻醉狀態(tài)下,腹部正中切口,臥位,輕柔將腸系膜取出,放置于恒溫觀察系統(tǒng)中選取直徑25-45μm,200μm長無明顯彎曲的微靜脈進(jìn)行基礎(chǔ)觀察,待狀態(tài)平穩(wěn),從基礎(chǔ)0min開始連續(xù)觀察30min,每隔10min記錄觀察同一視野的同一目標(biāo)血管的微循環(huán)狀態(tài),高速攝影機(jī)記錄。數(shù)據(jù)分析時使用Image-Pro Plus 6.0軟件慢速重放,測定紅細(xì)胞流速和管徑;沿血管計(jì)數(shù)滾動白細(xì)胞和粘附白細(xì)胞的數(shù)量;熒光顯微鏡觀察細(xì)靜脈FITC-標(biāo)記的血漿白蛋白的漏出血管情況,分析血管外內(nèi)熒光強(qiáng)度比。5)機(jī)制分析:造模4w、6w尾尖取血通過血球計(jì)數(shù)器分析白細(xì)胞數(shù)、血小板數(shù),以及中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞百分率;造模6w斷尾法測定大鼠出血時間;造模6w后通過可視化顯微鏡動態(tài)觀察Fec13致大鼠頸動脈、腸系膜動脈血栓形成時間。結(jié)果1)體征觀察:正常組大鼠狀態(tài)良好,活動正常,毛發(fā)光澤順暢,二便正常;模型組大鼠從睡眠剝奪第2w開始到6w大鼠體重明顯低于正常組(P0.01),而且體重增長速度較正常比較慢,神態(tài)慵懶,毛色從略微發(fā)黃到發(fā)黃,毛發(fā)糙而不順,情緒易怒,有氣無力,形體瘦弱,大便松散;模型組大鼠較正常組大鼠SBP、MBP、DBP均有下降的趨勢,但未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。2)體表微循環(huán):造模2w,大鼠舌像G值明顯高于正常組(P0.05),舌面G、B及足底的R、G、B值與正常組無顯著差異,大鼠脈搏幅度值與正常組無明顯差異;模型組大鼠體表(耳廓、足底)血流灌注量與正常組無明顯差異;造模4w觀察大鼠舌面R(P0.01)值顯著低于正常組,舌面G、B值有下降趨勢但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;大鼠脈搏幅度明顯低于正常組(P0.05),模型組大鼠左耳(P0.01)、右耳(P0.01)血流灌注量均明顯低于正常組,足底血流灌注量也表現(xiàn)低下的趨勢;造模6w大鼠舌面、足底R、G、B值無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,模型組大鼠脈搏幅度明顯低于正常組大鼠(P0.01);模型組大鼠左耳(P0.01)、右耳(P0.01)血流灌注量也明顯低于正常組,大鼠左足、右足血流灌注量有低于正常組的趨勢,但未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。3)腸系膜微循環(huán):造模6w后,持續(xù)30min內(nèi)腸系膜微循環(huán)狀態(tài)變化如下:在正常組和模型組血管管徑無顯著差異的前提下,從基礎(chǔ)狀態(tài)開始,模型組大鼠微靜脈紅細(xì)胞流速低于正常組大鼠,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,從基礎(chǔ)狀態(tài)Omin開始到整個過程中,模型組微靜脈內(nèi)滾動的白細(xì)胞數(shù)量就明顯多于正常組(P0.05-0.01),模型組大鼠從基礎(chǔ)狀態(tài)開始即存在粘附的白細(xì)胞,比正常組多,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,模型大鼠微靜脈血管外內(nèi)熒光強(qiáng)度比從基礎(chǔ)狀態(tài)即明顯高于正常組大鼠(P0.01)。4)機(jī)制分析:造模4w,尾尖全血細(xì)胞分析外周血細(xì)胞數(shù)量,模型組大鼠整體白細(xì)胞數(shù)量明顯多于正常大鼠(P0.05),占白細(xì)胞數(shù)量比例高的中性粒細(xì)胞的百分率已經(jīng)明顯高于正常組大鼠(P0.01),而作為白細(xì)胞中另外一種淋巴細(xì)胞,其所占百分率明顯低于正常組大鼠(P0.01),血小板的數(shù)量并無顯著差異;造模6w,大鼠尾尖出血時間明顯低于正常組(P0.01),提示血小板狀態(tài)可能存在一定的變化;外周血白細(xì)胞數(shù)量有高于正常組的趨勢,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;中性粒細(xì)胞的百分率持續(xù)明顯高于正常組大鼠(P0.01);淋巴細(xì)胞百分率仍明顯低于正常組大鼠(P0.01),血小板的數(shù)量也未顯示顯著差異;Fec13所誘導(dǎo)的模型組大鼠腸系膜動脈血栓形成時間明顯低于正常組大鼠(P0.05),而頸動脈血栓形成時間,模型組與正常組相比較短,但未顯示統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論水環(huán)境小平臺站立睡眠剝奪法建立的大鼠氣虛血瘀證模型,其表現(xiàn)出明顯的微循環(huán)障礙,具體表現(xiàn)為:舌像、足底RGB值降低,脈搏幅度降低,體表耳廓、足底血流灌注量減少;腸系膜微靜脈紅細(xì)胞流速降低,滾動和粘附白細(xì)胞數(shù)量的增多,微靜脈血管通透性增大;尾尖外周血細(xì)胞數(shù)量的變化,出血時間的縮短,體內(nèi)動脈血栓形成時間的縮短;該變化過程基本符合中醫(yī)臨床氣虛血瘀證病因病機(jī)過程。氣虛血瘀證形成過程中可能是白細(xì)胞粘附功能、血管內(nèi)皮受損、血小板功能發(fā)生變化導(dǎo)致其微循環(huán)障礙,可以通過改善微循環(huán)指標(biāo)為模型評價和氣血相關(guān)疾病提供治療新靶點(diǎn)。通過觀察睡眠剝奪大鼠氣虛血瘀證所建立的微循環(huán)狀態(tài)評價體系,可用于血瘀證模型評價和中醫(yī)藥功效的研究。
【學(xué)位單位】：中國中醫(yī)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R228;R-332
【部分圖文】：

從睡眠剝奪２ｗ開始體重明顯低于正常組（Ｐ＜邋０．０１），而且體重X棾に俁冉險義銑１冉下裉祭�，毛色从聲灑发活l椒⒒疲⒉詼凰�，情绪抑，精辶x仙裎遙釁蘗Γ蟊闥繕�，体重结果见表１，哇E�。辶x媳恚貝笫竺恐芴逯厙榭觶

本文編號：2831994