目的:目前越來(lái)越多的證據(jù)顯示干細(xì)胞是通過旁分泌/內(nèi)分泌的作用促進(jìn)急性腎損傷的修復(fù)。如果其保護(hù)作用是通過內(nèi)分泌的作用,那么注射干細(xì)胞條件培養(yǎng)液應(yīng)該可以取得良好效果,但目前關(guān)于此研究結(jié)論仍不統(tǒng)一。方法:本試驗(yàn)中我們通過培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞然后將其通過尾靜脈注射的方法注入到缺血再灌注模型鼠體內(nèi),同時(shí)將條件培養(yǎng)液注入到小鼠的體內(nèi),在不同時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)病理的改變,細(xì)胞增生情況和管周毛細(xì)血管的減少來(lái)比較骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和條件培養(yǎng)液對(duì)模型鼠的作用。結(jié)果:顯示骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞注入改善了腎功能及腎臟病理的改變,明顯降低了死亡率。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞同時(shí)也促進(jìn)了腎臟微血管的修復(fù),減輕了管周毛細(xì)血管的丟失增加了實(shí)質(zhì)細(xì)胞的增生,減少了單核-巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn),減少了凋亡細(xì)胞的數(shù)量。雖然我們鑒定出條件培養(yǎng)液中含有促進(jìn)血管再生的細(xì)胞因子,包括肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子,血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子和胰島素樣生長(zhǎng)因子,但是在損傷修復(fù)的整個(gè)階段我們并沒有發(fā)現(xiàn)條件培養(yǎng)液有任何的促進(jìn)作用。結(jié)論:在本試驗(yàn)中的數(shù)據(jù)顯示骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的注入可以促進(jìn)腎臟的修復(fù),可以促進(jìn)管周毛細(xì)血管和腎小管上皮細(xì)胞的再生。雖然,骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可以分泌大量的促血管生長(zhǎng)因子,但是條件培養(yǎng)液并沒有顯示出明顯的促腎臟修復(fù)的作用,提示骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可能是通過旁分泌的機(jī)制而不是內(nèi)分泌的機(jī)制起到腎臟保護(hù)作用的。本試驗(yàn)的結(jié)果提示在腎臟受損之后骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可以提供一個(gè)良好的治療手段。
【學(xué)位單位】：哈爾濱醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2014
【中圖分類】：R692;R-332
【部分圖文】：

圖 1. MSCs 形態(tài)，流式細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果及誘導(dǎo)分化。(A)光鏡顯示 MSCs 具有典型的梭形的形態(tài), 放大 100 倍. (B)顯微共聚焦 CMFDA 染色是典型的梭形形態(tài)，標(biāo)尺 50um. (C) 流式細(xì)胞分析顯示培養(yǎng)的 MSCs 表達(dá) CD73，CD90，CD105，CD44 陽(yáng)性，而-CD45，CD11b 及 CD34陰性。(D)茜素紅，堿性磷酸酶及油紅 O 染色證實(shí) MSCs 可以分化為脂肪細(xì)胞和骨細(xì)胞。Figure 1. The MSC phenotype,flow cytometry graphs and differentiation abilit(A). Light microscopy revealed that the MSCs had a spindle shape. MagnificationX100. (B).Confocal image of MSCs exhibit the typical morphology (Bars, 50Bm)(C)Flow cytometry analysis of one representative MSC population stained witanti-CD73, CD90, CD105, CD44, CD45, CD11b and CD34 monoclonal antibodies.(D)OiRed O staining determined differentiation to adipocytes. Alizarin Red S was useto show differentiation to osteocytes. Alkaline phosphatase staining also confirmedifferentiation to osteocytes.

30圖.2. CMFDA 染色的 MSCs 在腎臟的數(shù)目比較。(A- C)顯示了實(shí)驗(yàn)的 3,5,7 天 MSCs 到達(dá)受損腎臟的情況(D)第3天招募到右腎的MSCs。(E)柱形圖顯示了3,5,7天左腎及右腎MSCs隨時(shí)間變化。以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,#P < 0.01 與右腎比較(n=6)Fig.2. CMFDA labeled  MSCs recruited to the injured kidney. (A-C).Representative confocal image of day 3 ,5,7 post I/R injury kidney after intravenoustransfer of MSCs showing the CMFDA labeled-MSCs detected in left kidney (arrowheads).

d-MSCs detected in right kidney on days 3. (E) Graph indicating the nbeled-MSCs identified in left and right kidney with time post I/R inan values±SD.#P<0.01,vs.right kidney (Bars, 50Bm).件培養(yǎng)液中含有 HGF, VEGF-A and IGF-1證 MSCs 促進(jìn)急性腎衰竭修復(fù)的機(jī)制，檢測(cè)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是臟修復(fù)的生長(zhǎng)因子，我們使用 ELISA 方法測(cè)定了 CM 中的 IGF-1，結(jié)果發(fā)現(xiàn) MSCs 可以分泌 HGF, VEGF-A 和 IGF-1，CM 分時(shí)，48 小時(shí)和 72 小時(shí)，不同時(shí)間點(diǎn)之間沒有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，我們可以設(shè)想 CM 可能具有促進(jìn)腎臟衰竭修復(fù)的作用，在實(shí)驗(yàn)可能也有明顯的作用。

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