目的研究自噬在氣管狹窄家兔模型中的表達及活化狀態(tài),初步探討自噬在家兔氣管狹窄發(fā)病過程的意義。方法18只雄性家兔根據(jù)隨機數(shù)字表法均分成空白對照組(C)、生理鹽水組(NS)、紅霉素組(EM)3組,每組6只。按照文獻方法建立家兔氣管狹窄模型后,C組不予以任何處理,術(shù)前7 d至術(shù)后9 d期間,NS組予以生理鹽水0.54 mg/kg霧化,EM組予以紅霉素7.5 mg/kg喂食,均為2次/d。術(shù)后第10天處死家兔,收集氣管標(biāo)本。利用HE染色觀測氣管上皮層及固有層病理變化,測量氣管上皮層及固有層厚度,應(yīng)用Masson染色檢測氣管上皮層及固有層中膠原纖維面積比例,運用實時熒光定量PCR檢測氣管組織中轉(zhuǎn)化生長因子β-1(TGF-β1)、Ⅰ型膠原蛋白(COL1A1)、Ⅲ型膠原蛋白(COL3A1)、自噬相關(guān)基因3(ATG3)、自噬相關(guān)基因5(ATG5)的mRNA相對表達量,運用免疫組化法檢測TGF-β1、COL1A1、COL3A1纖維化因子蛋白的相對表達量,運用Western blot法檢測微管相關(guān)蛋白1輕鏈β_3(LC3B)、ATG3、ATG5蛋白的表達水平。結(jié)果(1)氣管上皮層(EPI)及固有層(LP)厚度檢測:家兔氣管狹窄模型中發(fā)現(xiàn),NS組的上皮層及固有層厚度最大(1.49±0.28mm),顯著高于C組(0.24±0.39mm),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),予以紅霉素干預(yù)后,氣管上皮層及固有層厚度(0.47±0.08mm)明顯較NS組減少,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(2)Masson染色:C組、NS組、EM組氣管上皮層及固有層中膠原纖維面積積所占比例分別為(6.79±0.67)%、(40.55±5.40)%、(27.48±0.43)%,組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均P0.05)。(3)實時熒光定量PCR:各處理組TGF-β1、COL1A1、COL3A1、ATG3、ATG5因子mRNA相對表達量與氣管的上皮層及固有層厚度密切相關(guān)。在NS組,TGF-β1、COL1A1、COL3A1因子mRNA的相對表達量均顯著高于C組,而ATG3 mRNA和ATG5 mRNA的相對表達量均顯著低于C組,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(均P0.05)。予以紅霉素干預(yù)后,TGF-β1、COL1A1、COL3A1因子mRNA的相對表達量均顯著低于NS組,ATG3和ATG5mRNA的相對表達量均顯著高于NS組,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(均P0.05)。(4)免疫組化:在各組氣管組織中可見TGF-β1、COL1A1、COL3A1蛋白在上皮層及固有層中均有表達,大部分表達在上皮層的上皮細胞及固有層的間質(zhì)細胞的胞漿中。在NS組中,TGF-β1、COL1A1、COL3A1蛋白相對表達水平均顯著高于C組(均P0.05),在EM組中TGF-β1、COL1A1、COL3A1蛋白相對表達水平均顯著低于NS組(均P0.05)。(5)Western Blot:在NS組中,LC3B-Ⅱ/Ⅰ蛋白比值、ATG3和ATG5蛋白表達水平均顯著低于C組(均P0.01),紅霉素干預(yù)后蛋白表達水平均顯著高于NS組(均P0.01)。結(jié)論(1)在家兔氣管黏膜受損后狹窄模型中,纖維化因子TGF-β1、COL1A1、COL3A1表達均顯著升高,其可能參與了氣管纖維化的發(fā)生發(fā)展過程。(2)家兔氣管發(fā)生狹窄后自噬表達水平降低,紅霉素可提高其表達水平,同時還可以減輕氣管黏膜纖維化程度,可能是紅霉素通過上調(diào)自噬表達水平來改善氣管纖維化的過程。
【學(xué)位單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R562.12;R-332
【部分圖文】：

自噬在氣管狹窄動物模型中的表達及意義 2018屆碩士學(xué)位論文Tracheal lumenII2-A 2-B 2-C1.2 家兔氣管組織的鏡下上皮層及固有層厚度1.2.1 鏡下測量氣管上皮層及固有層的具體測量方法如圖2所示在高倍顯微鏡下將氣管上皮層及固有層均分為5個相等部分I-V，依次測量從氣管腔的上皮層至固有層的厚度。

± 0.08）mm 顯著低于 NS 組，但仍顯著高于 C 組意義（均 P＜0.05）。（表 2-1，圖 3）表 2-1. 各組氣管上皮層及固有層厚度 （mm）Table 2-1. Thickness of EPI and LP in each group （mGroup Number meanC 6 0.24 NS 6 1.49aEM 6 0.47b注：a：與空白對照組比較(均 P＜0.05)b：與生理鹽水組比較(均 P＜0.05)Note: a, vs C group (all, P < 0.05)b, vs NS group (all, P < 0.05)

自噬在氣管狹窄動物模型中的表達及意義 2018屆碩士學(xué)位論文1.3 Masson 染色結(jié)果在 C 組，在上皮層未見明顯呈綠色的膠原纖維表達，在固有層中有少量膠原纖維表達，其中膠原纖維面積所占比例為（6.79±0.67）%。而在 NS組的上皮層及固有層中均有大量膠原纖維表達，膠原纖維面積所占比例為（40.55±5.40）%，EM 組上皮層及固有層中綠染面積明顯較 NS 組減少，膠原纖維面積所占比例為 (27.48±0.43)%，組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均 P＜0.05）（圖 4-A、B、C，圖 5，表 2-2）。

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 李莉華;徐明鵬;甘羅曼;黎雨;梁毅林;李文濤;覃恩愿;甘敬華;柳廣南;;小劑量紅霉素對氣管損傷后肉芽組織增生的影響[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2017年10期

2 宋巖;楊靜;季文樾;;大耳白兔氣管切開術(shù)后炎癥及機械損傷導(dǎo)致氣管狹窄的實驗研究[J];中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2009年01期

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本文編號：2826292