發(fā)布時(shí)間：2020-09-16 21:12

　　 噬菌體天然抗體庫通常具有庫容大、多樣性好的優(yōu)勢(shì),可廣泛用于人源靶點(diǎn)治療及診斷抗體篩選。但由于天然抗體庫中抗體序列多來自IgM,未經(jīng)刺激成熟,體內(nèi)親和力較IgG型偏弱。將獲得的scFv序列組裝至IgG全長后,親和力通常為10~(-7)至10~(-8) M級(jí),難以滿足對(duì)親和力要求較高時(shí)的需求。本論文通過針對(duì)不同的靶點(diǎn)的結(jié)構(gòu)特征、項(xiàng)目需求進(jìn)行抗體淘選和篩選實(shí)驗(yàn)。首先,抗原分別選取細(xì)胞表面胞外區(qū)蛋白、多跨膜蛋白、人源抗原和鼠源抗原,進(jìn)行直接法和間接法Elisa實(shí)驗(yàn),優(yōu)化抗體的檢測(cè)方法。其次,淘選階段選取不同的結(jié)合形式,分別選取固相篩選、液相篩選、細(xì)胞篩選和高通量儀器進(jìn)行淘選,并選取不同的抗原篩選起始濃度,對(duì)比Output抗體序列的數(shù)量和陽性率,優(yōu)化淘選方法。其三,在篩選階段通過優(yōu)化Elisa形式、緩沖液類型和試劑濃度等方式,增加抗原與噬菌體顆粒之間的檢測(cè)窗口,提高陽性數(shù)值,減少假陽性。通過這一系列的優(yōu)化手段,最終獲得多個(gè)滿足需求的高親和力抗體(10~(-9)至10~-1010 M)。這些淘選和篩選方法的優(yōu)化研究,有利于提高最終抗體的陽性率和多樣性,為利用噬菌體展示抗體庫高通量篩選獲得目標(biāo)抗體提供了方法學(xué)上的參考。
【學(xué)位單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R392
【部分圖文】：

絲狀噬菌體復(fù)制過程和結(jié)構(gòu)圖

體的兩邊基因?yàn)榫�形、雙鏈開鏈結(jié)構(gòu)，其末端帶有 12 個(gè)左單鏈 DNA 構(gòu)成[7,10,11]。T4 噬菌體展示系統(tǒng)也是一種較為系統(tǒng)[12]。它的主要特點(diǎn)是衣殼蛋 S℃和 H℃的 C 端中能夠白分別融合，從而展示于 T4 噬菌體的表面，故而蛋白純會(huì)因?yàn)閺?fù)雜的純化手段而導(dǎo)致蛋白失活和變性。T7 噬菌體于其他體系，發(fā)展的較晚。T7 展示系統(tǒng)的衣殼蛋白有 10A式，一般會(huì)情況下會(huì)采用 10B 衣殼蛋作為表達(dá)和融合外源。T7 噬菌體的一個(gè)主要特點(diǎn)是生長周期比較快，節(jié)省了時(shí)蛋白大小范圍廣，可多表達(dá) 50 多個(gè)氨基酸的多肽片段，酸的蛋白。T7 噬菌體整體的耐受性較強(qiáng)，耐酸、耐堿、件下較為穩(wěn)定，非常利于篩選不同條件下和環(huán)境下的目標(biāo)本身活性。

上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文的表達(dá)水平，HuCAL-PANTINUM 的總庫容達(dá)到 4.5×1010,正確率超過 70文獻(xiàn)報(bào)道的庫容最大，正確率最高的抗體庫�；旌蠋焓侵笇⒎謩e構(gòu)建的各類抗體庫（包括天然抗體庫，合成抗體成抗體庫）中的 2- 3 種不同的類型的各類子庫混合在一起構(gòu)建而成的新型混合庫的有點(diǎn)，有天然庫及半合成抗體庫的特點(diǎn)，提高抗體庫的多樣性用性。理論上篩到各種抗原結(jié)合的特異性抗體。

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本文編號(hào)：2820379