發(fā)布時(shí)間：2020-09-14 13:38

　　 B7-H4分子是B7家族的成員之一,其特異性表達(dá)在多種腫瘤組織中,如乳腺癌、肺癌、食管癌、卵巢癌、前列腺癌、胃癌等,并與疾病的不良預(yù)后有關(guān)。B7-H4分子通過(guò)與受體的結(jié)合發(fā)揮免疫負(fù)調(diào)控的作用,可以有效抑制T細(xì)胞的增殖、活化和細(xì)胞因子的產(chǎn)生來(lái)介導(dǎo)腫瘤的免疫逃逸。已有研究表明,利用B7-H4的抗體可以促進(jìn)抗腫瘤免疫效應(yīng)[1]。通過(guò)抑制B7-H4分子與B7-H4受體的結(jié)合,從而促進(jìn)機(jī)體免疫細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷。由此可見(jiàn),B7-H4的受體在腫瘤免疫中的作用和地位,但由于B7-H4受體尚未克隆,關(guān)于其受體的研究較少,本課題組通過(guò)腹水誘生法用表達(dá)B7-H4受體的扁桃體細(xì)胞去免疫小鼠,從而得到了抗B7-H4受體的單克隆抗體10A10。本研究主要利用抗B7-H4受體的抗體10A10,通過(guò)其與B7-H4受體的特異性結(jié)合,研究B7-H4受體的表達(dá)與肺癌臨床指征的關(guān)聯(lián)性。主要通過(guò)檢測(cè)肺癌細(xì)胞株和肺癌組織中B7-H4受體的表達(dá)來(lái)明確B7-H4受體在細(xì)胞和組織中的表達(dá),另一方面,通過(guò)對(duì)肺癌組織芯片進(jìn)行免疫組化研究,建立B7-H4受體表達(dá)與肺癌臨床表現(xiàn)的關(guān)聯(lián),以期為肺癌的臨床診斷與治療提供一種方向。一、采用抗B7-H4受體的抗體10A10檢測(cè)B7-H4受體在肺癌細(xì)胞株H1299和A549以及肺癌組織中的表達(dá)【目的】檢測(cè)肺癌細(xì)胞株H1299和A549中B7-H4受體的表達(dá);檢測(cè)B7-H4受體在肺癌和癌旁組織中的表達(dá),為下一步實(shí)驗(yàn)做準(zhǔn)備�！痉椒ā坷每笲7-H4受體的抗體10A10,通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)B7-H4受體在肺癌細(xì)胞株H1299和A549中的表達(dá)情況。通過(guò)細(xì)胞爬片,利用細(xì)胞染色檢測(cè)B7-H4受體在細(xì)胞中的表達(dá)和定位。利用免疫組化的方法,檢測(cè)B7-H4受體在肺癌組織和癌旁組織的不同表達(dá)和其表達(dá)的定位�！窘Y(jié)果】流式結(jié)果顯示,B7-H4受體在肺癌細(xì)胞株H1299和A549中均有表達(dá),且其在兩種細(xì)胞中的表達(dá)有差異,B7-H4受體在A549中的表達(dá)略強(qiáng)于H1299,為57%,在H1299中的表達(dá)為40%。細(xì)胞染色結(jié)果顯示,A549的染色強(qiáng)于H1299,與流式的檢測(cè)結(jié)果一致。此外,通過(guò)細(xì)胞染色可以發(fā)現(xiàn),B7-H4受體在H1299和A549中的表達(dá)主要定位在細(xì)胞核和細(xì)胞漿。肺癌和癌旁組織的免疫組化結(jié)果顯示,B7-H4受體在組織中均有表達(dá),主要定位在細(xì)胞核和細(xì)胞漿,且癌組織的著色明顯強(qiáng)于癌旁組織。【結(jié)論】B7-H4受體在肺癌細(xì)胞株H1299和A549以及肺癌組織中均有表達(dá),且主要表達(dá)在細(xì)胞核和細(xì)胞漿中。二、采用抗B7-H4受體的抗體10A10檢測(cè)B7-H4受體在肺腺癌組織芯片中的表達(dá)并分析其與臨床指標(biāo)的關(guān)聯(lián)性【目的】檢測(cè)B7-H4受體在肺癌和癌旁組織中的表達(dá)并分析其與肺癌病人臨床病理參數(shù)的關(guān)聯(lián)性。【方法】購(gòu)買(mǎi)肺腺癌病人的150點(diǎn)組織芯片。其中,肺癌組織為75點(diǎn),癌旁組織為75點(diǎn),且為一一對(duì)應(yīng)。通過(guò)免疫組化的方法,檢測(cè)肺腺癌芯片組織中B7-H4受體的表達(dá)水平,并根據(jù)組織著色的陽(yáng)性率和染色強(qiáng)度對(duì)其進(jìn)行評(píng)分,利用SPSS軟件分析染色評(píng)分與病人病理參數(shù)的關(guān)聯(lián)性。【結(jié)果】免疫組化結(jié)果顯示,B7-H4受體主要表達(dá)在肺腺癌樣本的細(xì)胞漿和細(xì)胞核,其在肺腺癌癌組織和癌旁組織的表達(dá)有差異,且癌組織胞漿的表達(dá)強(qiáng)于癌旁組織胞漿的表達(dá);癌組織胞核的染色也強(qiáng)于癌旁組織。關(guān)聯(lián)性分析顯示,B7-H4受體在癌組織與癌旁組織胞漿的表達(dá)具有相關(guān)性,且為正相關(guān);B7-H4受體在癌組織胞核的表達(dá)和癌旁組織胞核的表達(dá)呈現(xiàn)正相關(guān);此外,B7-H4受體在癌組織胞核的表達(dá)和患者性別、臨床分期相關(guān);癌旁組織胞核的表達(dá)和患者性別相關(guān)。生存分析顯示,在單因素分析中,B7-H4受體在癌組織和癌旁組織的表達(dá)都與病人的預(yù)后相關(guān)。另外,腫瘤大小、T分期、N分期、臨床分期也分別和病人的預(yù)后顯著相關(guān)。多因素分析中,B7-H4受體在癌組織胞核中的表達(dá)和腫瘤大小可以作為病人獨(dú)立的預(yù)后因素。【結(jié)論】B7-H4受體在肺腺癌中的表達(dá)和病人的預(yù)后相關(guān),并且其在病人組織胞核中的表達(dá)和腫瘤大小可作為獨(dú)立的預(yù)后因素之一。
【學(xué)位單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R392
【部分圖文】：

培養(yǎng) 48h 后，CD25Foxp3T 細(xì)胞在 CD4T 細(xì)胞中的比例升高[24]，這4 可促進(jìn)調(diào)節(jié)性 T 細(xì)胞的增殖。在腫瘤微環(huán)境中，腫瘤組織中高表達(dá)的 B7-H4 分子導(dǎo)致 CD3+和 CD8+的淋巴細(xì)胞(TAL)數(shù)目顯著減少[25]，高表達(dá) B7-H4 的腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(T瘤微環(huán)境中也可以顯著地阻抑 CD8+T 細(xì)胞的活化和增殖功能[26]，從而細(xì)胞在機(jī)體中轉(zhuǎn)移和生長(zhǎng)[27]。當(dāng)運(yùn)用 siRNA 干擾技術(shù)沉默 TAM 上 達(dá)后，對(duì) CTL 的這種抑制效應(yīng)不再顯現(xiàn)。在腫瘤微環(huán)境內(nèi)，B7-H4 能通過(guò)在不同細(xì)胞成分的選擇性表達(dá)從而抑制性 T 細(xì)胞的活化和增殖。B7-H4 的其他作用還包括阻滯細(xì)胞毒性 T 淋巴)細(xì)胞周期進(jìn)展和減少細(xì)胞因子的產(chǎn)生。B7-H4 通過(guò)以上途徑負(fù)性調(diào)節(jié) T疫應(yīng)答。B7-H4 分子異常表達(dá)可使機(jī)體對(duì)腫瘤的免疫監(jiān)視作用減弱，從瘤免疫逃逸。此外，有研究發(fā)現(xiàn) B7-H4 還可通過(guò)抑制中性粒細(xì)胞的前體從而抑制固有免疫應(yīng)答，進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤細(xì)胞免疫逃逸的發(fā)生。

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