【摘要】：目的:慢性高原病(CMS)以紅細胞過度增生和低氧血癥為特征,其主要病因為機體缺氧。本研究以常氧組為對照,檢測CMS模型大鼠HAMP m RNA、GDF15 m RNA及其蛋白表達水平和其他相應的鐵代謝指標(包括血清鐵、血清鐵蛋白),旨在探討兩者的改變及其相互關(guān)系,明確CMS大鼠鐵代謝的變化。方法:將59只健康雄性Wistar大鼠,從蘭州到西寧,適應性喂養(yǎng)2周后進行實驗。隨機分為2組,即常氧對照組22只(西寧,海拔2260m,溫度18-20℃),低氧實驗組37只(低壓氧艙模擬海拔5000m,氧濃度10.8%,壓力54.02Kpa,溫度18-20℃,22h/d),30天后進行檢測:(1)血氣分析、血常規(guī)檢測;(2)比色法測定血清鐵及免疫發(fā)光法測血清鐵蛋白;(3)ELISA法檢測血清及肝臟勻漿hepcidin含量;(4)采用熒光實時定量RT-PCR法檢測肝臟HAMP m RNA、GDF15 m RNA水平;(5)采用免疫組化法檢測大鼠胸骨GDF15蛋白水平;(6)隨機選取常氧組大鼠6只,低氧組大鼠5只,用于肺動脈壓檢測;(7)實驗數(shù)據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件處理,首先行正態(tài)性檢驗,資料均為正態(tài)分布或近似正態(tài)分布,數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差(`x±s)表示,兩組間比較用獨立樣本的t檢驗,等級資料用秩和檢驗,CMS組各指標間的相互關(guān)系用直線相關(guān)分析,以α=0.05為檢驗水準。結(jié)果:(1)同常氧組大鼠HCT(53.02±2.92)%、HGB(185.69±12.14)g/L、平均肺動脈壓(29.78±4.47)mm Hg、血清鐵(0.87±0.11)μmol/L、血清鐵蛋白(2.05±0.21)μg/L、胸骨GDF15蛋白表達積分(3.43±1.09)比較,低氧組HCT(71.33±5.34)%、HGB(248.88±17.36)g/L、平均肺動脈壓(66.06±17.36)mm Hg、血清鐵(2.17±0.35)μmol/L、血清鐵蛋白(11.52±1.58)μg/L、胸骨GDF15蛋白表達積分(5.08±0.70)等指標升高(均P0.05);同常氧組大鼠的PLT(758.75±92.77)×109/L、血清hepcidin水平(14.16±4.49)ng/ml、肝臟hepcidin水平(154.79±95.08)ng/ml相比較,低氧組PLT(472.09±117.90)×109/L、血清hepcidin水平(10.13±5.53)ng/ml、肝臟hepcidin水平(64.04±40.30)ng/ml降低(均P0.05);常氧組和低氧組的SO2相比無明顯統(tǒng)計學差異(P0.05)。(2)低氧組肝臟HAMP m RNA表達(0.67±0.33)低于常氧對照組(1.03±0.27)(P0.05),低氧組肝臟GDF15 m RNA表達(4.46±2.58)高于常氧對照組(1.10±0.54)(P0.05);低氧組HAMP m RNA、GDF15 m RNA與HGB、HCT均無相關(guān)性(P0.05)。(3)CMS組HGB分別與SI(r=0.925,P=0.000)、SF(r=0.612,P=0.000)呈正相關(guān),與血清hepcidin水平(r=-0.405,P=0.021)呈負相關(guān);CMS組HCT分別與SI(r=0.889,P=0.000)、SF(r=0.562,P=0.001)呈正相關(guān),與血清hepcidin(r=-0.367,P=0.039)水平呈負相關(guān);CMS組SI與SF呈正相關(guān)(r=0.573,P=0.001),與血漿hepcidin水平呈負相關(guān)(r=-0.43,P=0.014)。結(jié)論:低氧條件下鐵代謝的調(diào)節(jié)基因hepcidin表達下調(diào),鐵調(diào)素在CMS中維持較低水平,促進了機體鐵吸收同時增加了儲存鐵的動員,進一步促進紅細胞增殖。GDF15在CMS中表達增加,可能與CMS紅系成熟有關(guān),是聯(lián)系紅系生成和鐵調(diào)控的信號分子,從而進一步豐富了CMS的理論研究。
【學位授予單位】：青海大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R594.3;R-332
【圖文】：

圖 2.1 雙抗體夾心 ELISA 法實驗原理示意圖（3）測試所需儀器設備450nm 酶標儀、EP 管、吸水紙、Hepcidin 檢測試劑盒（4）試劑準備：① 分別將試劑盒中所有的試劑、標本緩慢均衡至室溫（18-25℃）。② 標準品的配制：標準品中加入標準品稀釋液1ml，蓋好后室溫靜置大約10min，同時反復搓動以助溶解，Hepcidin標準品原始濃度為80 ng/ml。準備稀釋標準品的EP管，每個EP管加入500μl的標準品稀釋液，再分別依次倍比稀釋為如下濃度：40 ng/ml ，20 ng/ml，10 ng/ml，5 ng/ml，2.5 ng/ml，1.25 ng/ml，0.625ng/ml，標準品稀釋液（0ng/ml）直接作為空白孔。(表2.4)。表 2.4 Hepcidin 標準品的稀釋方法80 ng/ml 1 號標準品 原倍標準品40 ng/ml 2 號標準品 500μl 的 1 號標準品加入 500μl 標準品稀釋液20 ng/ml 3 號標準品 500μl 的 2 號標準品加入 500μl 標準品稀釋液

測定血清hepcidin的標準曲線

）繪制標準曲線后計算血清 hepcidin、肝臟 hepcidin 濃度值：X 軸為 O.D. 軸為標準品濃度，標準曲線如圖 2.2-2.3。圖 2.2 測定血清 hepcidin 的標準曲線Figure2.2 The standard curve of hepcidin in serumy=1.2114x2+13.411x+0.4762R2=0.9973

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本文編號：2779700