【摘要】：目的:探討低溫條件下COPD模型大鼠肺部菌群的變化。方法:1.建立SD大鼠COPD的動(dòng)物模型,采用煙熏聯(lián)合脂多糖氣管內(nèi)滴注構(gòu)建。實(shí)驗(yàn)分組:正常對(duì)照組、室溫(21℃)COPD造模組、低溫(5℃)COPD造模組。2.ELISA法檢測(cè)正常對(duì)照組和造模后大鼠血清中相關(guān)炎性因子的表達(dá)水平以及HE染色法觀察肺組織病理學(xué)改變。3.16SrDNA擴(kuò)增測(cè)序:獲取各組大鼠肺組織后,進(jìn)行研磨勻漿,提取細(xì)菌基因組總DNA,采用PCR進(jìn)行16SrDNA擴(kuò)增,純化并構(gòu)建文庫(kù),采用HiSeq 2500PE250平臺(tái)測(cè)序分析,對(duì)結(jié)果進(jìn)行物種注釋分類、聚類分析、多樣性分析、物種差異分析以及菌群功能預(yù)測(cè)等生物信息學(xué)分析。結(jié)果:1.大鼠血清相關(guān)炎性因子檢測(cè)結(jié)果顯示,COPD造模組大鼠血清IL-1β、TNF-α的含量明顯高于正常對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義((P0.05);IL-6的表達(dá)在正常對(duì)照組與COPD造模組之間均無(wú)明顯差異(p0.05)。2.COPD大鼠肺組織病理學(xué)半定量分析結(jié)果顯示,COPD造模組的MAN低于正常對(duì)照組,而MLI大于正常對(duì)照組,兩者有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異(分別為P0.01和P0.01)。其中低溫造模組的MLI較室溫造模組稍低,MAN在室溫造模組稍高,但兩者無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。3.正常對(duì)照組與COPD造模組大鼠肺組織菌群的變化(1)測(cè)序分析示各組大鼠肺組織菌群在門(mén)水平共注釋到7個(gè)門(mén),主要有無(wú)壁菌門(mén)(Tenericutes)、變形菌門(mén)(Proteobacteria)、擬桿菌門(mén)(Bacteroidetes)、厚壁菌門(mén)(Firmicutes)、梭桿菌門(mén)(Fusobacteria)、以及低豐度的放線菌門(mén)(Actinobacteria)、藍(lán)藻菌門(mén)(Cyanobacteria)等細(xì)菌門(mén)類,另外還有分類地位不明的未知細(xì)菌(Bacteria:Other)。(2)在屬分類水平共注釋到10個(gè)屬,主要包括:支原體(Mycoplasma)、弧菌屬(Vibrio)、絲狀菌屬(Filobacterium)以及低豐度的擬桿菌屬(Bacteroides)、鏈桿菌屬(Streptobacillus)、不動(dòng)桿菌屬(Acinetobacter)、普氏桿菌屬(Prevotella_9)、博代氏桿菌屬(Bordetella)、微桿菌屬(Exiguobacterium)、Boechera_gunnisoniana等細(xì)菌屬類;另外還有分類地位不明的未知細(xì)菌(Bacteria:Other)。(3)在門(mén)水平上,COPD造模組無(wú)壁菌門(mén)(Tenericutes)、放線菌門(mén)(Actinobacteria)、梭桿菌門(mén)(Fusobacteria)的相對(duì)豐度明顯低于正常對(duì)照組(p0.05),變形菌門(mén)Proteobacteria的相對(duì)豐度明顯增加(p0.00);在屬水平上,支原體(Mycoplasma)的相對(duì)豐度較正常對(duì)照組減少(p0.05),而弧菌屬(Vibrio)、擬桿菌屬(Bacteroides)的相對(duì)豐度較正常對(duì)照組明顯增加(p0.01)。(4)Alpha多樣性分析提示正常對(duì)照組大鼠菌群多樣性較室溫造模組、低溫造模組顯著降低(p0.01),室溫造模組菌群多樣性也低于低溫造模組,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。(5)Beta多樣性分析提示造模組大鼠肺組織菌群結(jié)構(gòu)組成與正常對(duì)照組存在差異,其中低溫造模組的肺組織菌群結(jié)構(gòu)與正常對(duì)照組之間的差異最為明顯。(6)物種差異性分析中,正常對(duì)照組中物種注釋到特異性顯著的菌屬為假單胞菌屬,而低溫造模組的物種注釋特異性顯著的菌屬為絲狀菌屬及鞘氨酸桿菌屬。(7)菌群功能預(yù)測(cè)中Pathway注釋到了細(xì)胞凋亡的新陳代謝途徑以及碳水化合物、嘧啶生物合成、氨基-tRNA生物合成、氧化磷酸化代謝、能量代謝相關(guān)的途徑。結(jié)論:1.COPD模型大鼠血清中TNF-α、IL-1β較正常對(duì)照組表達(dá)增加,TNF-α、IL-1β參與了COPD的氣道炎癥反應(yīng),并且起到一定的促炎作用。2.COPD模型大鼠肺組織菌群多樣性和構(gòu)成與正常對(duì)照組大鼠之間存在明顯差異,疾病狀態(tài)下大鼠肺部菌群結(jié)構(gòu)發(fā)生失衡,低溫條件可致COPD大鼠的肺部微生態(tài)發(fā)生改變。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R563.9;R-332
【圖文】：

第 3 章 結(jié)果各組大鼠肺組織平均內(nèi)襯間隔(MLI)以及平均肺泡數(shù)(MAN)數(shù)據(jù)如單位面積內(nèi)，B、C 模型組的 MAN 低于 A 正常對(duì)照組，而 MLI 大照組，兩者有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異(分別為 P<0.005 和 P<0.005)。其中 較 B 組稍低，MAN 在 C 組稍高，但兩者無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。表 3.1A、B、C 三組大鼠肺組織 MLI 和 MAN 的比較(x±S)組別 鼠數(shù)(只) MLI(μm) MAN（個(gè)/10-2）A 5 33.56±4.21 4.62±0.33B 8 44.28±3.52** 3.69±0.40**C 5 40.31±3.86** 3.82±0.27****與 A 組(正常對(duì)照組)比較 P<0.01

第 3 章 結(jié)果各組大鼠肺組織平均內(nèi)襯間隔(MLI)以及平均肺泡數(shù)(MAN)數(shù)據(jù)如單位面積內(nèi)，B、C 模型組的 MAN 低于 A 正常對(duì)照組，而 MLI 大照組，兩者有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異(分別為 P<0.005 和 P<0.005)。其中 較 B 組稍低，MAN 在 C 組稍高，但兩者無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。表 3.1A、B、C 三組大鼠肺組織 MLI 和 MAN 的比較(x±S)組別 鼠數(shù)(只) MLI(μm) MAN（個(gè)/10-2）A 5 33.56±4.21 4.62±0.33B 8 44.28±3.52** 3.69±0.40**C 5 40.31±3.86** 3.82±0.27****與 A 組(正常對(duì)照組)比較 P<0.01

圖 3-1 造模組及正常對(duì)照組肺臟肉眼觀 圖 3-2 COPD 造模型組大鼠肺組織 HE 染色 100×圖 3-3 正常對(duì)照組大鼠肺組織 HE 染色：小氣道、小血管（左兩圖均 400×，右圖為 40×）圖3-4COPD 模型組大鼠肺組織HE 染色：小氣道、小血管病變（左兩圖均400×，右圖為40×）

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 包鶴齡;方利文;王臨虹;;1990-2014年中國(guó)40歲及以上人群慢性阻塞性肺疾病患病率Meta分析[J];中華流行病學(xué)雜志;2016年01期

本文編號(hào)：2772421