【摘要】：[目的]觀察在銀屑病小鼠模型中衣原體蛋白Pgp3的干預對皮損以及IL-17、IL-22、IFN-γ表達水平的影響。[方法]通過大腸埃希菌表達融合蛋白GST-Pgp3,通過谷胱甘肽巰基轉移酶(GST)磁珠純化蛋白,用PreScission蛋白酶將GST標簽后切除后得到蛋白Pgp3。把24只SPF飼養(yǎng)、體重18-20g、6-8周齡BALB/C雌性小鼠隨機分成空白對照組、模型組,外涂對照組,外涂蛋白pgp3高濃度組(1000μg/ml),外涂蛋白pgp3低濃度組(50μg/ml),外涂CT795蛋白對照組。除了空白對照組外,其他5組小鼠用咪喹莫特(imiquimod,IMQ)誘導小鼠銀屑病樣皮損的模型,同時,除了空白對照組和模型組外,其他4組小鼠均給予干預:對照組外用PBS 200μl,外涂蛋白pgp3高濃度組外用濃度為1000μg/ml的蛋白200μl,外涂蛋白pgp3低濃度組外用濃度為50μg/ml的蛋白200μl,外涂CT795蛋白對照組外用濃度為1000μg/ml的蛋白200μl。動物實驗期間每天觀察小鼠背部皮損區(qū)的變化,并根據(jù)銀屑病小鼠模型的評分標準(TSS)每天觀察并記錄下小鼠皮損的變化,并給與評分。實驗完成后,處死小鼠,取小鼠皮損區(qū)組織,一部分做病理切片,并在顯微鏡下觀察各組小鼠皮損區(qū)組織形態(tài)學的改變,一部分組織采用Real Time PCR(Real-time Polymerase Chain Reaction)檢測小鼠皮損中IL-17、IL-22、IFN-γRNA的表達水平并分析其變化。[結果]外用Pgp3蛋白干預的小鼠的皮損較模型組、對照組和外用CT795蛋白組明顯改善,TSS評分也低于模型組、外涂對照組和外涂CT795蛋白組,Real-Time PCR結果示外用Pgp3蛋白組干預組小鼠的皮損中IL-17、IL-22、IFN-γ的表達低于模型組和CT795蛋白組,其差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)[結論]在銀屑病小鼠模型中,衣原體蛋白Pgp3干預后,可以抑制小鼠銀屑病樣皮損的發(fā)展,并且可以抑制IL-17、IL-22、IFN-γ的表達。
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R758.63;R-332
【圖文】：

圖 1：質粒 pGEX-6P-1（1）、Pgp3（2）驗證 的鑒定轉化 pGEX-6P-1/Pgp3 至 E.coli BL21 感受用 IPTG 進行誘導表達，用 GST 磁珠純化后gp3，然后用 PP 酶切除標簽，得到純化的蛋DS PAGE 電泳分別鑒定 GST-Pgp3、Pgp3小。見下圖 2：

圖 2：純化 GST-Pgp3 及 Pgp3 純化與濃縮結果：A：濃縮蛋白 Pgp3；B：融合蛋白 GST-Pgp3；C：純化蛋白 Pgp33.3 蛋白 Pgp3 的濃縮鑒定結果BCA 蛋白測定在超微量微孔板分光光度計 OD562nm 處測得濃度為2838μg/ml。在超凈臺內，用 PBS 將濃縮后的 Pgp3 蛋白稀釋成濃度為 1000μg/ml及 50μg/ml 兩種不同濃度后（注意無菌操作），然后分裝在 EP 管中，每個 EP 管分裝 200μl，-80℃凍存?zhèn)溆谩Ｒ娤聢D 3：

天津醫(yī)科大學碩士學位論文 一、衣原體蛋白 Pgp3 對小鼠銀屑病皮損以及 IL-17、IL-22、IFN-γ 的影響第 2 天 第 4 天 第 6 天 第 8 天

【參考文獻】

相關期刊論文 前2條

1 丁曉嵐;王婷琳;沈佚葳;王曉艷;周城;田珊;劉盈;彭光輝;周俊娥;薛樹旗;王仁利;唐英;孟雪梅;裴廣德;白云花;劉青;李航;張建中;;中國六省市銀屑病流行病學調查[J];中國皮膚性病學雜志;2010年07期

2 張廣中;王萍;李若瑜;王莒生;;銀屑病流行病學研究進展[J];實用皮膚病學雜志;2008年04期

本文編號：2771925