【摘要】：[目的]應用在體的電生理記錄技術和神經(jīng)藥理學方法來研究促腎上腺皮質激素釋放因子(CRF)對感覺刺激誘發(fā)小鼠小腦皮層分子層場電位反應的影響機制。[實驗材料與方法]選取周齡約為6-8的昆明小鼠,測量其體重并按照1.3g/kg的劑量在小鼠腹腔行烏拉坦麻醉。為了避免實驗中小鼠呼吸道堵塞,待角膜反射消失后進行氣管插管。將小鼠放置在定制的立體定位儀上,經(jīng)一系列預處理后,小心的在小腦CrusⅡ區(qū)行鉆孔術,直徑約1-1.5mm,確保不傷及腦組織,并去除表面顱骨。在顯微鏡下小心取出硬腦膜,并使用蠕動泵將氧合的人造腦脊髓液(人造腦脊髓液,ACSF)連續(xù)滴注在暴露的腦表面。使用特殊的吹風機將頭發(fā)(50-60毫秒,50-60磅/平方英寸)吹至同一胡須緩沖墊,作為由計算機刺激的三叉神經(jīng)感覺,以控制頭發(fā)刺激并同步電生理學記錄;電生理記錄選擇分子層場電位,用于記錄的電極填充ACSF20-30 μL,使其電極阻抗為4-6MΩ。使用膜片鉗放大器和數(shù)據(jù)軟件記錄分子層場電位的感覺刺激變化。數(shù)據(jù)分析使用Clampfit 10.3軟件進行。使用SPSS軟件進行統(tǒng)計分析。使用T檢驗配對測試來比較施用前后的平均值。P0.05被認為有統(tǒng)計學意義。[結果](1)在麻醉狀態(tài)下,小鼠觸角墊的毛發(fā)刺激引起小腦分子層的場電位反應,其表現(xiàn)為短負極性波(N1)后的大正極性波(P1);在腦表面灌流CRF(300 nM)后,小腦皮質分子層抑制性成分P1的振幅和半寬值均顯著增加,與給藥前比較差異顯著(P0.05)。(2)腦表面灌流CRF影響P1的波形動力學,導致上升時間縮短,延遲時間增加,二者給藥前后比較均有顯著性差異(P0.05)。(3)CRF對吹風刺激誘發(fā)小鼠小腦分子層場電位的抑制性成分P1振幅值的影響具有濃度依賴性。濃度-反應曲線顯示隨著CRF濃度的增加,吹風刺激引起的P1的振幅值的增加程度越明顯,引起感覺刺激變化的最小濃度是10 nM,最大濃度為1 μM,半數(shù)有效濃度(EC50)為234 nM。(4)在非選擇性CRF-R阻斷劑的存在下,CRF對對吹風刺激誘發(fā)小鼠小腦分子層場電位的抑制性成分P1振幅值的影響消失,P1的振幅值和半寬值沒有升高,表明CRF通過活化CRF受體增加吹風刺激誘發(fā)小鼠小腦分子層場電位P1的振幅和半寬值。(5)在CRF-R阻斷劑的存在下,腦表面灌流CRF對P1的波形動力學沒有顯著影響,上升時間和延遲時間與給藥前比較均沒有顯著性差異。[結論]CRF通過活化CRF-R增強感覺刺激誘發(fā)的小鼠小腦皮層分子層場電位的抑制性成分P1,影響其波形動力學,提示應激刺激可通過CRF受體作用于小腦皮層分子層神經(jīng)環(huán)路,影響外部信息的整合與傳遞。
【學位授予單位】：延邊大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R338

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10 尚建科;俞詩源;陳玉琴;張虎林;張t

本文編號：2715303