發(fā)布時間：2020-06-15 21:41

【摘要】：目的:利用SPF級Wistar大鼠,通過剖腹產(chǎn)與人工無菌飼喂技術(shù)獲得無菌大鼠。利用無菌大鼠分別建立深二度燙傷損傷模型和綠膿桿菌感染模型,比較這兩種模型和SPF級大鼠模型在愈合過程、炎性反應(yīng)、病理變化等方面的異同,探討燒傷過程中機體炎癥反應(yīng)對燒傷愈合的影響。內(nèi)容:大鼠隔離器放置于屏障環(huán)境中,利用15%過氧乙酸按照7m L/m3加水7m L熏蒸消毒2h,獲得無菌飼養(yǎng)環(huán)境。將SPF級Wistar大鼠在無菌環(huán)境下剖腹產(chǎn),獲得無菌乳鼠,利用經(jīng)消毒處理的人工乳進(jìn)行人工飼喂至乳鼠獨立飲食。繁育子一代后,進(jìn)行母乳喂養(yǎng)。利用子一代6周齡無菌大鼠,采用恒溫恒壓燙傷儀造成深二度燙傷,建立燙傷大鼠模型。將燙傷的無菌大鼠隨機分為兩組,一組在傷口處感染濃度為1×105CFU/m L的綠膿桿菌,一組不做處理,設(shè)立SPF級燙傷大鼠作為對照,比較三組大鼠的愈合過程、炎性反應(yīng)和病理變化等,分析燒傷過程中機體炎癥反應(yīng)對燒傷愈合的影響。方法:10周齡SPF級Wistar大鼠按照雌雄比2:1合籠,隔夜早上檢查陰栓,見栓者(見栓當(dāng)天記孕0天)獨立飼養(yǎng),懷孕21天大鼠在大鼠隔離器內(nèi)剖腹產(chǎn),獲得無菌乳鼠。乳鼠出生后14天內(nèi),每天利用人工乳灌胃6次,15~21天,每天灌服4次人工乳,直至乳鼠能獨立飲食。在乳鼠的生長過程中,傳入隔離器內(nèi)的任何物品均經(jīng)消毒使用,飼料、飲水、手術(shù)器械、飼養(yǎng)籠盒及燒杯等經(jīng)121℃30min高壓蒸汽滅菌,羊乳、嬰兒配方奶粉、新生牛血清采用60Co照射滅菌消毒后經(jīng)傳遞窗傳入隔離器內(nèi)。采用腦心浸液肉湯培養(yǎng)基、硫乙醇酸鈉培養(yǎng)基及血平皿,對剖腹產(chǎn)過程中沖洗孕鼠的胚胎、子宮所用的無菌生理鹽水,在37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)14天,無細(xì)菌檢出;大豆蛋白胨肉湯培養(yǎng)基在26℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7天,無真菌檢出。每隔兩周對乳鼠糞便稀釋液、咽拭子,以及隔離器環(huán)境進(jìn)行檢測,均無細(xì)菌檢出。十周后進(jìn)行交配,子一代乳鼠進(jìn)行細(xì)菌檢測也未有細(xì)菌檢出,獲得無菌大鼠。6周齡子一代雌性無菌大鼠,體重160~180g,在超凈工作臺內(nèi)采用恒溫恒壓燙傷儀94℃,8s,壓力500g造成大鼠深二度燙傷,隨機分為兩組,一組在傷口感染綠膿桿菌菌液,一組不做處理,創(chuàng)面保持無菌狀態(tài),另做一組用SPF級wistar大鼠在同樣條件下燙傷,創(chuàng)面不做處理。分別觀察三組大鼠的傷口結(jié)痂時間、脫痂時間和愈合時間,并在燙傷后24h、3天和7天,取血清,檢測炎性因子GM-CSF、IL-1α、TNF-α的變化,取皮膚、肺、胰腺、肝、腎組織固定在4%甲醛溶液中,用做組織病理,并在燙傷后7天利用平板記數(shù)法測定傷口菌群數(shù)量。結(jié)果:1成功獲得無菌大鼠,且具有生育傳代能力。2建立了無菌大鼠的深二度燙傷模型3三組大鼠愈合情況染綠膿桿菌無菌大鼠與對照組比較,開始結(jié)痂所需時間更長,且具有顯著性差異(P0.05);脫痂時間及愈合時間與無菌大鼠燙傷大鼠比較,反而較短,且具有顯著性差異(P0.05)。4三組燙傷大鼠炎癥反應(yīng)4.1血清中炎性因子TNF-α水平變化三組燙傷大鼠與未燙傷起始狀態(tài)比較,血清TNF-α水平均顯著升高,且有顯著性差異(P0.05);燙傷24h時,血清TNF-α水平有顯著性差異(P0.05),染綠膿桿菌無菌大鼠組顯著低于SPF級大鼠組和無菌大鼠組。4.2血清中炎性因子GM-CSF水平變化三組燙傷大鼠與未燙傷起始狀態(tài)比較,血清GM-CSF水平均顯著升高,且有顯著性差異(P0.05);燙傷大24h時,血清GM-CSF水平有顯著性差異(P0.05),無菌大鼠組顯著高于SPF級大鼠組和染綠膿桿菌無菌大鼠組;3天時,血清GM-CSF水平有顯著性差異(P0.05),無菌大鼠組顯著高于染綠膿桿菌大鼠組;7天時,血清GM-CSF水平有顯著性差異(P0.05),無菌大鼠組顯著低于SPF級大鼠組和染綠膿桿菌大鼠組。4.3血清中炎性因子IL-1α水平變化三組燙傷大鼠與未燙傷起始狀態(tài)比較,血清IL-1α水平均顯著升高,且有顯著性差異(P0.05);燙傷24h時,血清IL-1α水平有顯著性差異(P0.05),染綠膿桿菌無菌大鼠組和無菌大鼠燙傷組顯著高于SPF級大鼠燙傷組;3天時,血清IL-1α水平有顯著性差異(P0.05),染綠膿桿菌無菌大鼠組和無菌大鼠組顯著高于SPF級大鼠燙傷組。5病理變化病理切片顯示燙傷后一周內(nèi)三組大鼠的肝、腎、肺均有炎性細(xì)胞浸潤,嗜酸性增強、出血等反應(yīng),但沒有明顯的差異。染綠膿桿菌無菌大鼠24h時,皮下組織中可見淋巴細(xì)胞,有慢性炎性反應(yīng);3天時,真皮深層,有化膿性感染,橫紋肌周圍可見大量炎細(xì)胞;7天時,有輕微血管擴張充血,化膿性感染減輕,無菌燙傷大鼠與SPF級燙傷大鼠皮膚在燙傷后一周內(nèi)有輕到中度炎性反應(yīng),沒有明顯的差別。結(jié)論:1采用剖腹產(chǎn)凈化SPF級大鼠可以獲得無菌大鼠,且具有生育能力。2采用創(chuàng)新的燙傷方法可以獲得深二度燙傷模型。3深二度燙傷后,無菌大鼠對于燙傷刺激反應(yīng)激烈,血清中炎性因子迅速升高,SPF級大鼠由于自身攜帶菌群,機體免疫系統(tǒng)相對穩(wěn)定,與無菌大鼠比較,對小面積的深二度燙傷炎性反應(yīng),反應(yīng)較慢。4無菌大鼠小面積深二度燙傷傷口感染1×105CFU/m L的綠膿桿菌菌液與未感染綠膿桿菌無菌燙傷大鼠和SPF級燙傷大鼠比較,縮短了脫痂時間和愈合時間。
【學(xué)位授予單位】：軍事科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R644;R-332
【圖文】：

圖 1 培養(yǎng)基配制及隔離器沉降菌檢測.4 隔離器內(nèi)飲水、羊乳、奶粉和新鮮動物糞無菌檢測將無菌隔離器內(nèi)飲水、飼料、羊乳、奶粉等分別收集于經(jīng)高壓蒸汽滅菌 離心管中，密封后經(jīng)傳遞窗傳出大鼠隔離器。將已滅菌的硫乙醇酸鈉培養(yǎng)基浸液肉湯和大豆蛋白胨肉湯加熱煮沸至無色，置 45℃水浴箱平衡溫度。

圖 2 人工飼養(yǎng)乳鼠生長情況乳鼠在 9 日齡時，生長狀態(tài)良好，十天之后，開始消瘦，但體重仍持續(xù)增長， 21 天離乳時，體重達(dá)到 22～26g。乳鼠生長曲線

【參考文獻(xiàn)】

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1 孫堂卿;黃國寶;楊濤;張磊;吳秋合;;磨痂術(shù)對燙傷大鼠術(shù)后創(chuàng)面銅綠假單胞菌感染的干預(yù)作用研究[J];中華醫(yī)院感染學(xué)雜志;2017年22期

2 劉p蕓

本文編號：2715037