【摘要】：目的越來越多的證據(jù)表明,雌激素是影響良性前列腺增生(Benign Prostatic Hyperplasia,BPH)和前列腺癌(Prostate Cancer, PCa)發(fā)生發(fā)展的重要因素之一。本實(shí)驗(yàn)室之前的研究發(fā)現(xiàn),在前列腺間質(zhì)細(xì)胞WPMY-1中,前列腺素E2(Prostaglandin E2, PGE2)能夠通過上調(diào)雌激素相關(guān)受體a(Estrogen-related receptor alpha, ERRa)的表達(dá)進(jìn)而促進(jìn)芳香化酶的轉(zhuǎn)錄,由此導(dǎo)致雌二醇(17β-estradiol, E2)濃度的增加。其中芳香化酶是催化睪酮轉(zhuǎn)化為E2的限速酶。提示,前列腺中PGE2在促進(jìn)E2的生成中發(fā)揮重要的作用。ERRα作為第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的孤兒核受體,至今仍未發(fā)現(xiàn)其天然配體,而且對其轉(zhuǎn)錄活性的調(diào)節(jié)機(jī)制也尚不明確。本論文第一部分首次發(fā)現(xiàn)了PGE2能夠激活ERRa的轉(zhuǎn)錄活性,并進(jìn)而促進(jìn)芳香化酶的表達(dá)和E2的生成。在實(shí)驗(yàn)室之前的研究中,我們構(gòu)建了大鼠BPH模型,并使用激光顯微切割聯(lián)合表達(dá)譜基因芯片的方法研究單一類型細(xì)胞在BPH不同階段的基因表達(dá),發(fā)現(xiàn)早期生長反應(yīng)基因-1(Early Growth Response Gene-1,EGR-1)在BPH進(jìn)程中一直高表達(dá),并且在BPH早期的上皮細(xì)胞中上調(diào)最為明顯,提示EGR-1在大鼠BPH進(jìn)程尤其是BPH的發(fā)生中發(fā)揮重要作用。EGR-1被發(fā)現(xiàn)為PCa發(fā)病關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)基因之一,然而還尚未有報(bào)道其在BPH中的作用。本文第二部分研究了雌激素效應(yīng)基因EGR-1在BPH中的生物學(xué)功能以及雌激素對EGR-1及其下游基因的調(diào)節(jié)機(jī)制。這些工作為闡明雌激素生成及其影響B(tài)PH進(jìn)程的分子機(jī)制提供一些實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 第一部分PGE2通過激活ERRa轉(zhuǎn)錄活性上調(diào)前列腺間質(zhì)細(xì)胞中芳香化酶的表達(dá) 方法在WPMY-1細(xì)胞中轉(zhuǎn)染ERRa表達(dá)質(zhì)粒并添加PGE2,通過雙熒光素酶活性方法檢測ERRa反應(yīng)元件(ERRa response element,ERRE)報(bào)告基因的轉(zhuǎn)錄。轉(zhuǎn)染ERRa表達(dá)質(zhì)�；騭iRNA并添加PGE2, Real-time RT-PCR和Western blot檢測芳香化酶的表達(dá)。在WPMY-1細(xì)胞中添加PGE2,使用熒光成像和Western blot檢測ERRa蛋白胞內(nèi)分布情況。在WPMY-1細(xì)胞和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染ERRa表達(dá)質(zhì)粒的WPMY-1細(xì)胞中分別添加PGE2、PGE2受體(PGE2receptor,EP)2拮抗劑AH6809、EP3拮抗劑L798106、EP4拮抗劑AH23848、EP2激動劑Butaprost、EP3激動劑Sulprostone、EP4激動劑Cay10580、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide-3-kinase, PI3K)抑制劑LY294002、細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase, ERK)抑制劑U0126以及環(huán)磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate, cAMP)激活劑Forskolin,檢測細(xì)胞中芳香化酶以及ERRE報(bào)告基因的表達(dá)。在WPMY-1細(xì)胞中分別添加PGE2、Butaprost、Cay10580、 Forskolin、LY294002和U0126,Western blot檢測p-ERK及ERK的表達(dá)。在WPMY-1細(xì)胞中轉(zhuǎn)染ERRα表達(dá)質(zhì)粒并分別添加PGE2、LY294002和U0126,使用免疫共沉淀(Immunopreciptation,IP)及磷酸化蛋白染色的方法檢測p-ERRα的表達(dá)。 結(jié)果無血清培養(yǎng)條件下,過表達(dá)ERRα并不影響ERRE報(bào)告基因和芳香化酶的表達(dá),而當(dāng)加入PGE2后,上調(diào)作用即顯現(xiàn)。特異性siRNA沉默ERRα表達(dá)后,PGE2對芳香化酶的上調(diào)作用消失。PGE2能夠促進(jìn)ERRα核轉(zhuǎn)移。在WPMY-1細(xì)胞和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染ERRα表達(dá)質(zhì)粒的WPMY-1細(xì)胞中單獨(dú)加入EP拮抗劑AH6809,L798106或者AH23848并不能抑制PGE2對芳香化酶的上調(diào)效應(yīng),只有同時(shí)使用AH6809和AH23848才能抑制該效應(yīng)；Butaprost、Cay10580和Forskolin能夠上調(diào)ERRE報(bào)告基因和芳香化酶的表達(dá)；LY294002和U0126能夠抑制PGE2、Butaprost、Cay10580和Forskolin對ERRE報(bào)告基因和芳香化酶的上調(diào)效應(yīng)。LY294002和U0126能夠抑制PGE2、Butaprost、Cay10580和Forskolin對ERK的磷酸化。LY294002和U0126能夠抑制PGE2對ERRa的磷酸化。 結(jié)論P(yáng)GE2能夠激活EP2/EP4-PI3K-ERK信號通路,通過增加ERRα磷酸化以及促進(jìn)ERRα核轉(zhuǎn)運(yùn)激活ERRα轉(zhuǎn)錄活性,進(jìn)而上調(diào)ERRα靶基因芳香化酶的表達(dá)。 第二部分雌激素效應(yīng)基因EGR-1促進(jìn)前列腺增生上皮細(xì)胞系BPH-1的增殖 方法Real-time RT-PCR檢測大鼠BPH組織中EGR-1表達(dá)。免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry, IHC)方法檢測人BPH組織中EGR-1的表達(dá)。Real-time RT-PCR檢測人前列腺上皮細(xì)胞系RWPE-1及BPH-1中EGR-1表達(dá)。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染構(gòu)建EGR-1過表達(dá)BPH-1細(xì)胞系并使用Real-time RT-PCR和Western blot鑒定。MTT檢測EGR-1過表達(dá)BPH-1細(xì)胞系增殖水平；向BPH-1細(xì)胞中轉(zhuǎn)染EGR-1siRNA并使用MTT檢測其增殖水平；收集EGR-1過表達(dá)BPH-1細(xì)胞系的條件培養(yǎng)液(conditioned medium, CM)處理WPMY-1細(xì)胞,使用MTT檢測WPMY-1細(xì)胞增殖水平。在BPH-1細(xì)胞中添加E2,使用免疫細(xì)胞化學(xué)(immunocytochemistry, ICC)及Western blot檢測EGR-1蛋白胞內(nèi)分布。Real-time RT-PCR和酶聯(lián)免疫吸附反應(yīng)(enzyme linked-immuno-sorbent assay, Elisa)檢測EGR-1過表達(dá)以及siRNA、E2處理的BPH-1細(xì)胞中轉(zhuǎn)化生長因子β1(transforming growth factor β1, TGFβ1)和胰島素樣生長因子2(insulin-like growth factor2, IGF2)的表達(dá)。Real-time RT-PCR檢測EGR-1過表達(dá)BPH-1細(xì)胞系中前列腺素E合酶(prostaglandin E synthase, PTGES)和前列腺素內(nèi)過氧化物合酶1(prostaglandin-endoperoxide synthase1, PTGS1)的表達(dá)。 結(jié)果EGR-1在大鼠BPH組織、人BPH組織中以及BPH-1細(xì)胞系中表達(dá)增強(qiáng)。EGR-1過表達(dá)的BPH-1細(xì)胞增殖水平升高；特異性siRNA沉默EGR-1表達(dá)后BPH-1細(xì)胞增殖水平降低；EGR-1過表達(dá)BPH-1細(xì)胞的CM能夠促進(jìn)WPMY-1細(xì)胞增殖。E2能夠促進(jìn)EGR-1核遷移。過表達(dá)EGR-1后IGF2和TGFβ1表達(dá)水平增加；E2能夠上調(diào)IGF2和TGFβ1的表達(dá),而將EGR-1敲除后,該上調(diào)效果消失。過表達(dá)EGR-1后PTGES和PTGS1表達(dá)增加。 結(jié)論在大鼠及人BPH組織中EGR-1表達(dá)增強(qiáng)；EGR-1能夠促進(jìn)前列腺上皮細(xì)胞的增殖,還能通過旁分泌作用促進(jìn)間質(zhì)細(xì)胞的增殖；E2能夠促進(jìn)BPH-1細(xì)胞中EGR-1蛋白的核遷移進(jìn)而激活其轉(zhuǎn)錄活性,而且EGR-1介導(dǎo)了E2對IGF2和TGFβ1的調(diào)控。
【圖文】：

圖1.2前列腺中的雌激素效應(yīng)1. 1.3 ERR a在前列腺疾病中的作用1.1.3.1 ERR a研究現(xiàn)狀雌激素相關(guān)受體a (Estrogen-related receptor alpha, ERRa)屬于核受體超族，是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的孤兒核受體，孤兒核受體是指沒有天然配體的一類受[76]。ERRa 和 ERRP 是 1988 年由 Vincent Giguere 發(fā)現(xiàn)，以 ERa DNA 結(jié)合區(qū)(DNA-binding domain, DBD)的保守序列為探針蹄選到的兩個(gè)新基因[77]，列分析表明其與ERs有很強(qiáng)的同源性，所以命名為ERRs，目前該家族有ERRa、ERRP和ERRy三個(gè)成員。人ERRa蛋白由423個(gè)氨基酸組成，其編碼基因位染色體llql3位點(diǎn)；ERR(3蛋白由500個(gè)氨基酸組成，其編碼基因位于染色14q243位點(diǎn)；ERRy蛋白由458個(gè)氨基酸組成，其編碼基因位于染色體lq41位點(diǎn)178】。三種ERRs蛋白的DBD和配體結(jié)合區(qū)域（ligand-binding domain, LBD)

圖1.3 ERs和ERRs蛋白的DBD和LBD同源性分析三種ERRs在組織分布上有特異性。ERRa的表達(dá)范圍較廣，在胚胎期和成體組織中均能檢測到ERRa的表達(dá)，如胎盤尿囊紙膜，發(fā)育中的腎臟、心肌、消化道、骨豁、泌尿生殖器上皮、中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)、和褐色脂肪組織，以及成體中的心、腦、骨豁肌、腎、睪丸肝、肺、陰道等【77，8_]。ERRP的表達(dá)水平相對較低，最早也在胚胎期就被檢測到，但也只在最后發(fā)育成域毛膜的細(xì)胞中表達(dá)，ERRP在成年大鼠的腎臟、心臟、睪丸、腦、前列腺等組織中可檢測到，另外在成年小鼠的腎臟和心臟中有微弱表達(dá)，，ERRP在個(gè)體發(fā)育中也發(fā)揮重要作用，ERR卩的敲除的大鼠會由于晶胚發(fā)育障礙而死亡[82_84】。ERRy在胚胎期的大腦中高表達(dá)，在腎臟和肺中也有表達(dá)，在多種成體組織如心、腦、胎盤、骨路肌、腎、胰腺、腎上腺、甲狀腺、氣管、脊髓、視網(wǎng)膜、前列腺、睪丸、小腸中都可見其表達(dá)[85’86]。1. 1.3. 2 ERR a的表達(dá)調(diào)控
【學(xué)位授予單位】：南開大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R33

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 ;第九屆國際芳香化酶大會通知[J];中華乳腺病雜志(電子版);2008年03期

2 沈凌;李占魁;;腦芳香化酶的表達(dá)特點(diǎn)及其生物學(xué)意義[J];實(shí)用兒科臨床雜志;2006年22期

3 陸勁松;李鶴成;曹道成;狄根紅;吳炅;沈坤煒;韓企夏;沈鎮(zhèn)宙;邵志敏;;芳香化酶表達(dá)在淋巴結(jié)陰性乳腺癌中的預(yù)后價(jià)值[J];復(fù)旦學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2007年04期

4 張吉強(qiáng),蔡文琴;芳香化酶在腦和腫瘤中的表達(dá)、調(diào)控與意義[J];解剖科學(xué)進(jìn)展;1999年04期

5 胡榮,陳宗濤;芳香化酶在腦中的分布及其細(xì)胞定位[J];神經(jīng)解剖學(xué)雜志;2000年04期

6 張薏,魏麗惠;芳香化酶及其抑制劑在婦科腫瘤方面的研究[J];中國婦產(chǎn)科臨床;2001年01期

7 肖嵐,蔡文琴;芳香化酶與腦的發(fā)育和再生的相關(guān)性[J];解剖科學(xué)進(jìn)展;2002年01期

8 田寶民;張英懷;賈志宇;;芳香化酶在涎腺黏液表皮樣癌組織中的表達(dá)及意義[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2010年04期

9 付靜;沈中華;程飛雄;劉桂霞;李衛(wèi)華;唐峗;;芳香化酶的結(jié)構(gòu)、催化機(jī)制及其抑制劑研究進(jìn)展[J];藥學(xué)學(xué)報(bào);2012年01期

10 馬曉欣;王丹波;金英楠;張淑蘭;陸景明;矢內(nèi)原巧;;白介素1β與地塞米松聯(lián)合應(yīng)用對人成骨細(xì)胞芳香化酶活性的影響[J];中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2006年05期

相關(guān)會議論文 前10條

1 巴文君;張秋菊;孫麗萍;;芳香化酶的研究進(jìn)展[A];中醫(yī)藥生物化學(xué)與分子生物學(xué)通訊[C];2008年

2 王凌;李大金;王文君;朱影;;脫氫表雄酮對鼠成骨細(xì)胞芳香化酶和雌激素受體亞型轉(zhuǎn)錄的調(diào)控作用[A];首屆滬浙婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)論壇暨2006年浙江省婦產(chǎn)科學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2006年

3 張揚(yáng);張利紅;張為民;;黃鱔腦型P450芳香化酶的cDNA克隆和表達(dá)[A];第二屆中國動物學(xué)會比較內(nèi)分泌學(xué)分會和發(fā)育生物學(xué)分會聯(lián)合學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2005年

4 張林西;李海軍;金春亭;李玉珍;范婕;武欣;白美玲;;芳香化酶在乳腺癌組織中的表達(dá)[A];中華醫(yī)學(xué)會病理學(xué)分會2006年學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2006年

5 丁小文;楊紅健;鄒德宏;俞洋;孟旭莉;;新輔助化療對乳腺癌組織芳香化酶的影響[A];2006浙江省乳腺癌治療新進(jìn)展學(xué)習(xí)班暨浙江省抗癌協(xié)會乳腺癌專委會學(xué)術(shù)年會會議資料[C];2006年

6 翁強(qiáng);張夢遠(yuǎn);張浩林;坪田敏男;渡邊元;田谷一善;;野生貉(Nyctereutes procyonoides)卵巢內(nèi)細(xì)胞色素P450芳香化酶的免疫定位和其mRNA的表達(dá)[A];第一屆中華醫(yī)學(xué)會生殖醫(yī)學(xué)分會、中國動物學(xué)會生殖生物學(xué)分會聯(lián)合年會論文匯編[C];2007年

7 王凌;李大金;王文君;朱影;;脫氫表雄酮對鼠成骨細(xì)胞芳香化酶和雌激素受體亞型轉(zhuǎn)錄的調(diào)控作用[A];首屆滬浙婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)論壇暨2006年浙江省婦產(chǎn)科學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2006年

8 黃潔明;許麗綿;歐陽惠卿;胡斌;;羅氏內(nèi)異方對內(nèi)異癥大鼠模型異位內(nèi)膜芳香化酶表達(dá)的影響[A];第九次全國中醫(yī)婦科學(xué)術(shù)大會論文集[C];2009年

9 袁鷹;魯梅芳;王蓁;;肥胖并子宮內(nèi)膜癌病人腹部脂肪組織芳香化酶mRNA的表達(dá)[A];全國首屆代謝綜合征的基礎(chǔ)與臨床專題學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

10 張樂鳴;;芳香化酶抑制在乳腺癌治療中的若干問題[A];2006浙江省乳腺癌治療新進(jìn)展學(xué)習(xí)班暨浙江省抗癌協(xié)會乳腺癌專委會學(xué)術(shù)年會會議資料[C];2006年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前6條

1 何偉;月經(jīng)為何不“如期而至”[N];中國人口報(bào);2006年

2 ;女性如何關(guān)愛卵巢[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2008年

3 本報(bào)記者 白軼南;舍不得“口�！狈啦蛔∪榘N];保健時(shí)報(bào);2004年

4 本報(bào)記者 張偉;夏天并不是乳腺癌的高發(fā)期[N];健康時(shí)報(bào);2004年

5 保健時(shí)報(bào)實(shí)習(xí)記者 常華;胖大姐“絕經(jīng)”后提防乳腺癌[N];保健時(shí)報(bào);2006年

6 鄧榮沙 董愛娥;亦功亦過雌激素[N];上海中醫(yī)藥報(bào);2007年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前5條

1 王紹光;異位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞芳香化酶、凋亡信號通路和侵蝕性生長的研究[D];山東大學(xué);2004年

2 趙學(xué)英;子宮內(nèi)膜異位癥細(xì)胞芳香化酶的表達(dá)與芳香化酶抑制劑對細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)及子宮內(nèi)膜異位癥的蛋白指紋圖譜研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2004年

3 賀斌;一、芳香化酶基因多態(tài)性和十一酸睪酮藥物避孕差異相關(guān)性的研究 二、利用米非司酮藥物建立小鼠子宮出血模型的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2006年

4 寧召臣;PGE2對芳香化酶的調(diào)節(jié)機(jī)制及雌激素效應(yīng)基因EGR-1功能研究[D];南開大學(xué);2014年

5 苗琳;PGE2調(diào)節(jié)前列腺中芳香化酶和鈣結(jié)合蛋白S100A8分子機(jī)制的研究[D];南開大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 洪波;生理周期及致癇后雌性大鼠海馬細(xì)胞色素P450芳香化酶的動態(tài)表達(dá)[D];復(fù)旦大學(xué);2009年

2 田寶民;涎腺粘液表皮樣癌組織中芳香化酶與增殖細(xì)胞核抗原的表達(dá)及相互關(guān)系[D];河北醫(yī)科大學(xué);2005年

3 沈黎明;甘草提取物中芳香化酶小分子配體的發(fā)現(xiàn)及其芳香化酶抑制活性研究[D];浙江大學(xué);2011年

4 王曉彩;芳香化酶、雌激素受體、孕激素受體在漿液性上皮性卵巢腫瘤中的表達(dá)及意義[D];中國醫(yī)科大學(xué);2004年

5 李文金;乳腺癌芳香化酶表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系[D];蘇州大學(xué);2007年

6 邱麗貞;芳香化酶在乳腺的癌前病變組織中的表達(dá)意義[D];吉林大學(xué);2009年

7 王婉;芳香化酶在乳腺癌及增生性病變組織中的表達(dá)及意義[D];吉林大學(xué);2008年

8 鄭潔;人精子中芳香化酶表達(dá)與精子功能的關(guān)系[D];四川大學(xué);2005年

9 田君;PCOS模型大鼠P450芳香化酶表達(dá)的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2008年

10 董德梅;草魚腦芳香化酶的cDNA克隆、啟動子分離與轉(zhuǎn)錄活性的調(diào)控[D];電子科技大學(xué);2009年

本文編號：2696970