發(fā)布時(shí)間：2020-05-29 16:49

【摘要】：目的建立相對(duì)靜息狀態(tài)下在體骨細(xì)胞的體外模型,體外模擬其體內(nèi)生存的微環(huán)境,尋找骨細(xì)胞不同狀態(tài)下的標(biāo)志分子。方法1.采用I型膠原蛋白凝膠鋪板,并接種成骨細(xì)胞系MC3T3-E1,進(jìn)行成骨誘導(dǎo);2.分別取誘導(dǎo)14天、21天、28天、35天的細(xì)胞凝膠層進(jìn)行石蠟包埋切片;3.通過HE染色的方法觀察細(xì)胞形態(tài)以及細(xì)胞間連接;4.通過免疫組化的方法檢測(cè)成骨細(xì)胞標(biāo)志物RUNX2以及骨細(xì)胞標(biāo)志物DMP1的表達(dá);5.應(yīng)用該模型對(duì)骨細(xì)胞不同狀態(tài)下的標(biāo)志分子進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果1.在成骨誘導(dǎo)過程中,隨著培養(yǎng)天數(shù)的增加,細(xì)胞進(jìn)入凝膠的深度逐漸增加,且在第35天的HE染色切片中發(fā)現(xiàn)星狀、骨細(xì)胞樣細(xì)胞,且出現(xiàn)類似骨小管的小管狀結(jié)構(gòu)。在誘導(dǎo)14-28天時(shí),凝膠層細(xì)胞表達(dá)RUNX2逐漸減弱,直至誘導(dǎo)35天,RUNX2不表達(dá)。在誘導(dǎo)第28天時(shí),凝膠層細(xì)胞開始表達(dá)DMP1,并隨誘導(dǎo)天數(shù)的增加,表達(dá)逐漸增強(qiáng);2.在體骨組織切片中骨細(xì)胞不表達(dá)Notch1,體外骨細(xì)胞表達(dá)Notch1,而本骨細(xì)胞體外模型與在體骨組織切片中Notch1表達(dá)一致;3.成骨細(xì)胞系MC3T3-E1中,下調(diào)Notch2可使β-cantein及其下游靶基因Notch1以及Notch2本身的下游靶基因NFATc1表達(dá)增加,進(jìn)而影響骨重建;4.骨細(xì)胞系M LO-Y4中,下調(diào)Notch1可降低Notch2影響骨重建。結(jié)論1.成功的建立了相對(duì)靜息狀態(tài)下在體骨細(xì)胞的體外模型并能在體外模擬其體內(nèi)生存的微環(huán)境2.Notch1可作為判斷骨細(xì)胞不同功能狀態(tài)的標(biāo)志分子3.Notch1、Notch2相互作用影響骨重建
【圖文】：

圖 1-1 I 型膠原中培養(yǎng)成骨細(xì)胞系 MC3T3-E1 的整體實(shí)物圖從 I 型膠原中培養(yǎng)成骨細(xì)胞系 MC3T3-E1 的大體觀中發(fā)現(xiàn)，，隨著培養(yǎng)天數(shù)的增加，含有 MC3T3-E1 的凝膠受細(xì)胞的牽拉逐漸固縮。0 天 1421 天 28 天天35 天

10圖 1-2 I 型膠原中成骨細(xì)胞系 MC3T3-E1 的微觀形態(tài)學(xué)觀察采用 HE 染色的方法，在鏡下觀察 I 型膠原中成骨細(xì)胞系 MC3T3-E1 的微觀形態(tài)，發(fā)現(xiàn)隨著培養(yǎng)天數(shù)的增加，細(xì)胞進(jìn)入凝膠的深度逐漸增加，且在第 35 天的 HE 染色切片中發(fā)40X 40X 40X
【學(xué)位授予單位】：新疆醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R329.2

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本文編號(hào)：2687215