【摘要】：背景：胃動素(Motilin, MTL)由22個氨基酸組成,最早被J.C. Brown在豬十二指腸粘膜分離出來,是由小腸上段和空腸黏膜的Mo內(nèi)分泌細胞合成的一種腦腸肽。胃動素主要通過與胃動素受體相結(jié)合發(fā)揮作用。米勒等認為,胃動素受體在神經(jīng)及平滑肌表達不同的結(jié)合特性和藥理功能,故胃動素受體可分為神經(jīng)型(N)和肌肉型(M)兩種亞型。但在血管上是否存在胃動素受體少有報道。我們課題組在前期試驗中發(fā)現(xiàn),在消化間期,狗在意識清醒的狀態(tài)下,靜止期(Ⅰ相)時,胃血流是穩(wěn)定的,而在收縮期(Ⅱ和Ⅲ相),胃左動脈的血流水平提高到靜止期水平的240%,持續(xù)可達30分鐘。進入靜止期30分鐘以后,若在狗的靜脈內(nèi)持續(xù)性滴注胃動素,可在誘導(dǎo)出現(xiàn)與MMCIII期類似的胃及十二指腸運動的同時,也誘導(dǎo)了胃左動脈血流的增加,其類似于自然發(fā)生的周期性胃左動脈血流的變化。當(dāng)停止輸注胃動素時,胃左動脈血流的高度迅速恢復(fù)到靜止期水平。而胃動素受體拮抗劑(GM-109)則能完全抑制胃動素誘導(dǎo)的和自然發(fā)生的周期性胃血流的增加和胃和十二指腸運動,且GM-109持續(xù)性輸注停止以后,立即出現(xiàn)胃左動脈血流的升高和胃及十二指腸的運動。而在腸系膜上動脈及腸系膜下動脈均未發(fā)現(xiàn)上述類似變化。在此次實驗中,我們通過對狗胃腸道動脈上胃動素受體表達的研究,從組織細胞層面澄清了胃動素誘發(fā)消化間期在體狗胃左動脈周期性舒張的靶受體在胃左動脈內(nèi)皮細胞膜上,這為進一步研究胃動素對消化間期胃動脈血流量的調(diào)節(jié)的分子機制提供了有利的支持。胃動素通過與胃動素受體結(jié)合,在消化間期周期性地釋放并調(diào)節(jié)胃腸道的移行性復(fù)合運動(MMC)。MMC是人和哺乳動物與生俱來的基本運動形式,在整體生命活動中具有非常重要的生理意義,因此研究胃動素受體在整個胃腸道的分布、結(jié)構(gòu)和功能對治療胃腸動力性疾病具有潛在的臨床應(yīng)用價值。目的：1.研究胃動素受體在離體狗胃動脈上的表達,并與腸動脈的表達強度相比較；2.研究胃動素受體在離體狗的胃腸道管壁的分布并對表達強度進行比較。方法：1.用免疫組織化學(xué)方法(S-P法)及免疫熒光雙重染色方法檢測胃動素受體在狗胃左動脈、腸系膜上動脈、腸系膜下動脈上的表達；2.用RT-PCR法檢測胃動素受體mRNA在狗胃左動脈、腸系膜上動脈、腸系膜下動脈上的表達；3.用Western blot法檢測胃動素受體蛋白在狗胃左動脈、腸系膜上動脈、腸系膜下動脈上的表達。4.聯(lián)合應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法(S-P法)及RT-PCR法檢測胃動素受體在狗整個胃腸道各部位的表達并對表達強度進行比較；結(jié)果：1.免疫組織化學(xué)方法(S-P法)染色發(fā)現(xiàn)胃動素受體位于動脈內(nèi)皮細胞上,且相對于腸系膜上動脈及腸系膜下動脈,主要在胃左動脈上呈免疫組化強陽性表達,即動脈內(nèi)皮細胞出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒(P0.01)；2.免疫熒光雙重染色方法進一步確認胃動素受體位于動脈內(nèi)皮細胞膜上,且胃左動脈的免疫熒光強度明顯高于腸系膜上動脈及腸系膜下動脈(P0.01)；3.RT-PCR法檢測到狗胃左動脈、腸系膜上動脈、腸系膜下動脈上胃動素受體mRNA的表達,胃動素受體mRNA的表達量依次為胃左動脈腸系膜上動脈腸系膜下動脈,與免疫組化及免疫熒光結(jié)果相一致(P0.01)；4.Western blot法檢測到胃動素受體蛋白在狗胃左動脈、腸系膜上動脈、腸系膜下動脈上的表達,在狗胃左動脈表達量最高,其次為腸系膜上動脈,在腸系膜下動脈上最低,這與RT-PCR結(jié)果相吻合(P0.01)；5.免疫組織化學(xué)方法(S-P法)染色發(fā)現(xiàn)胃動素受體在狗胃竇、十二指腸、回腸、空腸、近端結(jié)腸、中端結(jié)腸的肌間神經(jīng)纖維和腸肌間神經(jīng)叢均呈免疫組化陽性表達,而遠端結(jié)腸呈陰性表達,表達強度由強到弱依次為：十二指腸回腸空腸近端結(jié)腸胃竇中端結(jié)腸遠端結(jié)腸(P0.05)；6.RT-PCR法檢測到狗胃竇、十二指腸、回腸、空腸、近端結(jié)腸、中端結(jié)腸胃動素受體mRNA的表達,表達強度由強到弱依次為：十二指腸回腸空腸近端結(jié)腸胃竇中端結(jié)腸遠端結(jié)腸(P0.05)。結(jié)論：1.胃動素受體位于血管內(nèi)皮細胞膜上；2.在支配胃腸道的動脈系中,胃動素受體在胃左動脈上呈優(yōu)勢表達,腸系膜上動脈上呈弱陽性表達,腸系膜下動脈呈陰性表達；3.胃動素受體分布于除了遠端結(jié)腸以外整個狗的胃腸道肌間神經(jīng)叢和神經(jīng)纖維；4.胃動素受體在狗胃腸道的表達強度由強到弱依次為：十二指腸回腸空腸近端結(jié)腸胃竇中端結(jié)腸遠端結(jié)腸。
【圖文】：

Trizol法提取總RNA具體過程

ｃ逡逑圖２．３邋ＬＧＡ上ＭＴＬＲ染色（一抗１：１００稀釋）逡逑圖２．３為ＬＧＡ上ＭＴＬＲ的免疫組化染色（４０0ｘ），陽性染色為沿逡逑動脈內(nèi)皮出現(xiàn)蹤黃色顆粒（黑色箭頭）；Ａ；染核的ＬＧＡＭＴＬＲ的逡逑表法；Ｂ；未染核的ＬＧＡ邋ＭＴＬＲ的表達；Ｃ；陰性對照。逡逑４５逡逑
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R333

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 孫國鳳;;三和化學(xué)研究所探討重組胃動素的事業(yè)化[J];生物技術(shù)通報;1990年04期

2 蔡昌豪;王孟薇;;胃動素研究進展[J];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學(xué)院學(xué)報;1991年04期

3 孫國鳳;;促進腸道蠕動的激素——胃動素[J];生物技術(shù)通報;1992年06期

4 趙一方;徐珞;;胃動素對大鼠下丘腦胃牽張敏感神經(jīng)元和胃運動的影響(英文)[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展;2010年03期

5 魯素彩,ItohZ;胃動素激動劑的發(fā)現(xiàn)與發(fā)展[J];中華消化雜志;1997年S1期

6 唐明,張洪燕,蔣正堯,徐珞,T.L.Peeters;中樞外源性胃動素對大鼠腦干胃相關(guān)神經(jīng)元電活動及胃運動的影響[J];生理學(xué)報;2000年05期

7 劉梅;董蕾;段鐘平;陳煜;劉旭華;鄭素軍;;胃動素受體在大鼠各腦區(qū)的分布[J];西安交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2010年05期

8 廖洪,許才紱,黃裕新,王慶莉;人胎兒胃腸及腦脊髓組織胃動素檢測[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;1993年02期

9 廖洪,許才紱,黃裕新,王慶莉;人胎兒胃動素的發(fā)生及分布研究[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;1993年06期

10 ;胃電活動與血清胃動素、5-羥色胺的關(guān)系[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2001年S1期

相關(guān)會議論文 前10條

1 張子燕;張曉春;;中醫(yī)藥對胃動素影響的研究概況[A];第23屆全國中醫(yī)兒科學(xué)術(shù)研討會暨兒科名中醫(yī)講習(xí)班論文匯編[C];2006年

2 劉梅;;胃動素受體在大鼠腦內(nèi)分布的實驗研究[A];第一屆全國疑難重型肝病大會、第四屆全國人工肝及血液凈化學(xué)術(shù)年會論文集[C];2008年

3 管延芳;蔣正堯;唐明;;海馬胃動素對胃運動的興奮作用及機制[A];中國生理學(xué)會第21屆全國代表大會暨學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2002年

4 徐珞;Theo Peetersb;;胃動素受體突變對胃動素和紅霉素激活作用的影響[A];中國微循環(huán)學(xué)會第五屆中國微循環(huán)學(xué)術(shù)大會論文摘要匯編[C];2004年

5 馮鑫;唐明;;杏仁核內(nèi)源性胃動素及其受體對胃動力的中樞調(diào)控[A];中國生理學(xué)會第21屆全國代表大會暨學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2002年

6 蔡立勉;王辛;鄧思珊;章麗金;;胃電活動與血清胃動素、5-羥色胺的關(guān)系[A];中華醫(yī)學(xué)會2001年全國胃電圖和胃腸動力研討會論文摘要集[C];2001年

7 馬衛(wèi)衛(wèi);黃志堅;曾東林;陳義杰;;牡蠣多糖對熱應(yīng)激小鼠消化道胃動素影響[A];2012年福建省畜牧獸醫(yī)學(xué)術(shù)年會論文集[C];2012年

8 蔣正堯;孫向榮;唐明;;胃動素受體激動劑對下丘腦葡萄糖反應(yīng)神經(jīng)元的作用[A];中國生理學(xué)會第21屆全國代表大會暨學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2002年

9 周呂;袁勃;王禮建;王玲;;Cajal細胞介導(dǎo)胃動素和促胰液素對胃起搏區(qū)電活動的作用[A];中國生理學(xué)會第21屆全國代表大會暨學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2002年

10 閻春玲;王守彪;唐明;;消化道傳入信號激活室旁核Motilin免疫陽性細胞的表達[A];中國生理學(xué)會第21屆全國代表大會暨學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2002年

相關(guān)重要報紙文章 前1條

1 傅俊英;四磨湯治療功能性消化不良機制部分探明[N];中國醫(yī)藥報;2010年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前4條

1 吳增yP;胃動素與結(jié)腸動力紊亂的關(guān)系及其作用機制[D];武漢大學(xué);2013年

2 楊嵐嵐;胃動素受體在狗胃腸動脈及其神經(jīng)系統(tǒng)的表達[D];吉林大學(xué);2014年

3 楊春敏;消化間期胃腸移行性復(fù)合運動的調(diào)節(jié)及其臨床意義[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1998年

4 王艷瑜;胃動素、胃泌素和促胰液素對人類食管下括約肌的調(diào)節(jié)機制[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 張玉萍;不同針刺強度對功能性消化不良患者臨床療效及血清胃動素的影響[D];安徽中醫(yī)藥大學(xué);2015年

2 趙一方;胃動素對大鼠弓狀核胃擴張反應(yīng)神經(jīng)元放電活動和胃運動的影響[D];青島大學(xué);2010年

3 馮鑫;杏仁核胃動素對大鼠胃運動的中樞調(diào)節(jié)作用[D];青島大學(xué);2001年

4 陳求招;功能性消化不良與胃粘膜胃動素、降鈣素基因相關(guān)肽的關(guān)系[D];福建醫(yī)科大學(xué);2012年

5 王志明;胃動素對豚鼠胃平滑肌舒縮活動的影響及機制研究[D];青島大學(xué);2009年

6 高志勝;紅霉素中樞擬胃動素作用及其誘導(dǎo)室旁核c-Fos蛋白表達[D];青島大學(xué);2001年

7 鐘鳳;新發(fā)現(xiàn)甲狀腺胃動素的表達及其臨床意義研究[D];青島大學(xué);2006年

8 孫向榮;胃動素受體激動劑紅霉素對大鼠下丘腦葡萄糖反應(yīng)神經(jīng)元的作用[D];青島大學(xué);2002年

9 許文達;Cajal間質(zhì)細胞培養(yǎng)、傳代及胃動素受體的表達[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2011年

10 王敏飛;胃動素及P物質(zhì)在膽石病病人血漿和膽囊組織中的含量及意義[D];中國醫(yī)科大學(xué);2005年

，

本文編號：2640619