【摘要】：樹突狀細(xì)胞(dendritic cells,DCs)是最為重要的專職性抗原提呈細(xì)胞(antigen presenting cells,APC),其所誘生的CD8+T細(xì)胞應(yīng)答是機(jī)體抗腫瘤和抗胞內(nèi)微生物感染的重要效應(yīng)細(xì)胞。我們前期的研究發(fā)現(xiàn),乙酰膽堿N型受體激動劑尼古丁刺激可促進(jìn)CD8+DCs介導(dǎo)的抗原交叉提呈,從而增強(qiáng)其抗腫瘤效應(yīng)。甘露糖受體MR作為DCs表面最重要的模式識別受體之一,它所介導(dǎo)的抗原內(nèi)吞是CD8+DCs介導(dǎo)抗原交叉提呈的關(guān)鍵步驟。文獻(xiàn)報道,OVA負(fù)載能夠促進(jìn)MR的K48多聚泛素化從而促進(jìn)抗原至內(nèi)體的定位,我們前期的研究也發(fā)現(xiàn),尼古丁刺激不僅上調(diào)了 MR的表達(dá)而且也促進(jìn)了內(nèi)吞抗原轉(zhuǎn)運(yùn)至內(nèi)體。但截至到目前,我們尚不清楚,MR發(fā)生K48多聚泛素化修飾過程中關(guān)鍵的E3連接酶以及其在CD8+DCs介導(dǎo)抗原交叉提呈中的作用。為此,本課題首先以Real-time PCR、Western Blot篩選可能的針對MR的K48多聚泛素化修飾的關(guān)鍵E3連接酶;次以免疫共沉淀技術(shù)檢測E3連接酶C-Cbl以及Cbl-c在內(nèi)體中的定位以及與MR的相互作用情況;再以基因沉默結(jié)合免疫共沉淀技術(shù)檢測C-Cbl以及Cbl-c基因沉默對MR的K48多聚泛素化修飾的影響;最后通過流式細(xì)胞術(shù)、激光共聚焦顯微鏡檢測C-Cbl以及Cbl-c基因沉默對交叉提呈產(chǎn)物SIINFEKL-H2Kb形成的影響。結(jié)果顯示:乙酰膽堿N型受體激動劑尼古丁刺激能夠促進(jìn)E3連接酶C-Cbl和Cbl-c基因水平和蛋白水平的表達(dá);尼古丁刺激顯著增強(qiáng)了 Cbl的磷酸化激活;尼古丁刺激不僅增加了 C-Cbl以及Cbl-c至內(nèi)體的定位,而且促進(jìn)了其與MR的相互作用;E3連接酶C-Cbl和Cbl-c基因沉默不僅逆轉(zhuǎn)了尼古丁刺激對MR的K48多聚泛素化的增強(qiáng)作用,而且減弱了 CD8+DCs交叉提呈的能力。綜上所述,本課題發(fā)現(xiàn)了 MR的K48多聚泛素化修飾過程中關(guān)鍵的E3連接酶,進(jìn)而完善了尼古丁促進(jìn)MR的K48多聚泛素化修飾從而增強(qiáng)CD8+DC交叉提呈的具體分子機(jī)制。
【圖文】：

外源性抗原攝取的機(jī)制決定了它被提呈的途徑，研究表明，如果模式逡逑抗原ＯＶＡ經(jīng)ＭＲ介導(dǎo)進(jìn)入ＤＣｓ，那么ＯＶＡ將被靶向到早期內(nèi)體進(jìn)而發(fā)生交叉逡逑提呈反應(yīng)啟動ＣＤ８＋的Ｔ細(xì)胞免疫應(yīng)答，如圖２所示；而清道夫受體介導(dǎo)外源性逡逑抗原內(nèi)吞進(jìn)入溶酶體降解為抗原肽，進(jìn)而與ＭＨＣＩＩ類分子結(jié)合，最終引起ＣＤ４＋逡逑的Ｔ細(xì)胞免疫應(yīng)答［Ｍ］。由此我們知道，ＭＲ是ＤＣｓ介導(dǎo)抗原發(fā)生交叉提呈的關(guān)逡逑鍵受體。ＢｕｒｇｄｏｒｆＳ等人的研宄發(fā)現(xiàn)，ＭＲ的胞質(zhì)區(qū)發(fā)生Ｋ４８多聚泛素化修飾是逡逑ＭＲ介導(dǎo)內(nèi)吞抗原轉(zhuǎn)位至胞質(zhì)中的先決條件〖６］。我們實(shí)驗(yàn)室前期的研宄也發(fā)現(xiàn)，，逡逑乙酰膽堿Ｎ型受體激動劑尼古丁能夠顯著增強(qiáng)ＤＣｓ的交叉提呈能力［８］，并且尼逡逑古丁刺激通過激活ＰＩ３Ｋ－Ａｋｔ－ｍＴＯＲ－ｐ７０Ｓ６通路上調(diào)了邋ＭＲ的表達(dá)［１３］。提示ＭＲ逡逑介導(dǎo)的內(nèi)吞抗原定位于早期內(nèi)體是ＣＤ８＋ＤＣＳ介導(dǎo)抗原交叉提呈的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，ＭＲ逡逑的Ｋ４８多聚泛素化修飾在此環(huán)節(jié)中占據(jù)重要地位。逡逑ＣＷ邐ＣＯＳ＇邐丫邋ＭＲ邋ｐ邋ＭＨＣＩ逡逑Ｔ邐由邋ｄ邐了邋⑶逡逑？ｐｉｎ0ｏ＿＊邐＊°ＶＡ邋ＭＨＣＨ逡逑＊邐＊邋ＯＶＡ－ｄｅｒｌｖｅｄ逡逑ＳＲ－ｍ？＜ｌｉａｔｅｄ邋／逡逑ｅｏｄｏｃｙｔｏｓｉｉ／邋＼邐＼逡逑呭巍獤躵>ＴＫ＇．“逡逑圖２迎介導(dǎo)的＃埃福郹埃８交叉提呈過程逡逑（ＢｕｒｇｄｏｒｆＳ，邋Ｓｃｉｅｎｃｅ．邋２００７，２７：３１６－６１２）逡逑３逡逑

的巨噬細(xì)胞以及內(nèi)皮細(xì)胞中。ＭＲ是由Ｎ端富含半胱氨酸的區(qū)域、ＩＩ型纖連蛋白逡逑重復(fù)區(qū)域（ＦＮＩＩ）、多個Ｃ型凝集素樣糖類識別區(qū)域、一個跨膜結(jié)構(gòu)域以及較短逡逑的Ｃ端胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域五個結(jié)構(gòu)域組成，如圖１所示。其胞外的富含半胱氨酸的結(jié)構(gòu)逡逑域具有凝集素活性，能夠與Ｓ０４－４－Ｎ－乙憸半乳糖胺、Ｓ０４－３－Ｎ－乙酰半乳糖胺和逡逑Ｓ０４－３－半乳糖結(jié)合；Ｃ型凝集素樣糖類識別區(qū)域能夠識別和結(jié)合甘露糖、巖藻糖逡逑和Ｎ－乙酰胺基葡萄糖為末端的糖類；胞漿內(nèi)段的１４１０、１４１１、１４４１三個賴氨酸逡逑殘基位點(diǎn)是ＭＲ發(fā)生泛素化修飾的位點(diǎn)。ＭＲ主要通過對甘露糖蛋白的清除在機(jī)逡逑體免疫自穩(wěn)態(tài)以及抗腫瘤免疫中發(fā)揮重要作用［１７＿１９］。逡逑２逡逑
【學(xué)位授予單位】：廈門大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R392

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本文編號：2631552