【摘要】：目的使用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中全基因組DNA甲基化水平,觀察其衰老過程中甲基化率的變化。方法從骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中提取DNA,使用酶解法將DNA分解成單個(gè)脫氧核苷,采用超高效液相色譜法分離,正離子電噴霧與多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式進(jìn)行定量,分析5-甲基脫氧胞嘧啶核苷、脫氧鳥嘌呤核苷的相對(duì)含量,計(jì)算全基因組DNA甲基化率。結(jié)果對(duì)1μg DNA樣本進(jìn)行1 h酶解反應(yīng),2 min內(nèi)可分析出5.00×10~(-4)水平以上的DNA甲基化率,日內(nèi)及日間精密度分別在7.12×10~(-2)和0.119以內(nèi)。隨著骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞傳代擴(kuò)增培養(yǎng),干細(xì)胞不斷衰老,其甲基化率逐漸降低,傳至P4~P6代時(shí),干細(xì)胞甲基化率最低,隨著傳代的繼續(xù),其甲基化率逐漸上升。結(jié)論此方法成功應(yīng)用于檢測(cè)研究骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在衰老過程中全基因組DNA甲基化水平的變化,得到了衰老影響骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞DNA甲基化的初步數(shù)據(jù)。經(jīng)考察,該方法樣本前處理方法簡(jiǎn)便,可操作性強(qiáng),定量方式快速準(zhǔn)確,具有良好的靈敏度與重復(fù)性。

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