【摘要】：目的 探討早產(chǎn)SD大鼠臍帶沃頓膠質組織分離大鼠臍帶間質干細胞的可能性,研究其生物學特征及體外誘導分化潛能,為下一步進行同種異體移植進行細胞生物療法奠定基礎。 方法 通過將SD大鼠按雄:雌=1:2人工合籠獲得孕19天大鼠,在無菌環(huán)境下通過剖宮產(chǎn)獲得新生大鼠,機械分離大鼠臍帶組織剔除血管組織獲得沃頓膠質組織,采用組織塊直接貼壁法在含10%FBS的DMEM/F12培養(yǎng)基中培養(yǎng)臍帶組織獲得大鼠臍帶沃頓膠質細胞,并進行傳代、凍存和復蘇;對培養(yǎng)所得大鼠臍帶沃頓膠質細胞采用直接計數(shù)法進行生長曲線繪制;通過細胞免疫組化檢測大鼠臍帶間質干細胞(rUCMSCs)中Brdu陽性表達;取3代rUCMSCs分別添加成脂誘導培養(yǎng)基和成骨誘導培養(yǎng)基進行誘導分化潛能鑒定;取3代rUCMSCs采用流式細胞儀進行細胞周期、細胞表面標記鑒定。 結果 大鼠臍帶沃頓膠質組織可在體外培養(yǎng)出梭形成纖維樣貼壁生長細胞;大鼠臍帶沃頓膠質細胞可在體外快速增殖;Brdu可在48小時內(nèi)高效摻入大鼠臍帶沃頓膠質細胞呈陽性表達;大鼠臍帶沃頓膠質細胞可在體外誘導體系中向成脂、成骨分化;大鼠臍帶沃頓膠質細胞92.14%處于G0-G1期,陽性表達間質干細胞表面抗原CD29、CD44和CD90,而不表達造血干細胞標記CD34和CD45。 結論 SD大鼠臍帶沃頓組織中可培養(yǎng)出大鼠臍帶沃頓膠質細胞,該細胞在形態(tài)學、生長增殖特點、誘導分化潛能和細胞表面抗原表達方面具有間質干細胞的形態(tài)特征,符合臍帶間質干細胞的鑒定標準,是一類多能干細胞,有望用于細胞生物治療、組織工程等研究。
【圖文】：

織塊周圍出現(xiàn)少量細胞生長，部分呈長梭形貼壁生長，部分細胞成多角形貼壁生長，隨時間增加細胞逐漸增多、密集而漸漸呈放射狀排列，至第 4 天時可見細胞排列密集(圖 1)，在高倍鏡下可見細胞以梭形為主，部分成多角形(圖 2)。而至第 6 天時可見組織塊周圍細胞成漩渦狀緊密排列，部分細胞融合，在遠離組織塊周圍的細胞排列相對稀疏，部分可見成多角形、星形或三角形，且大小不一(圖3)。經(jīng)胰酶消化后的 rUCMSCs 呈圓形,胞體較大,胞質透明，首次傳代后 24 h 內(nèi)完全貼壁伸展,至第 3 天時即可見細胞緊貼于培養(yǎng)瓶壁，部分呈成梭形纖維樣生長，且逐漸形成漩渦狀排列(圖 4)。第 2 代細胞在傳代 24 小時后即開始快速生長(圖 5)。細胞傳至第 3、4 代時，穩(wěn)定快速生長，細胞形態(tài)、大小與原代細胞無明顯變化(圖 6，圖 7)。

織塊周圍出現(xiàn)少量細胞生長，部分呈長梭形貼壁生長，部分細胞成多角形貼壁生長，隨時間增加細胞逐漸增多、密集而漸漸呈放射狀排列，至第 4 天時可見細胞排列密集(圖 1)，在高倍鏡下可見細胞以梭形為主，部分成多角形(圖 2)。而至第 6 天時可見組織塊周圍細胞成漩渦狀緊密排列，部分細胞融合，在遠離組織塊周圍的細胞排列相對稀疏，部分可見成多角形、星形或三角形，且大小不一(圖3)。經(jīng)胰酶消化后的 rUCMSCs 呈圓形,胞體較大,胞質透明，首次傳代后 24 h 內(nèi)完全貼壁伸展,至第 3 天時即可見細胞緊貼于培養(yǎng)瓶壁，，部分呈成梭形纖維樣生長，且逐漸形成漩渦狀排列(圖 4)。第 2 代細胞在傳代 24 小時后即開始快速生長(圖 5)。細胞傳至第 3、4 代時，穩(wěn)定快速生長，細胞形態(tài)、大小與原代細胞無明顯變化(圖 6，圖 7)。
【學位授予單位】：廣州醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R329

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本文編號：2577573