【摘要】：NK細胞活化型受體2D (Natural killer group2member D, NKG2D)表達于多種免疫細胞的表面,在免疫應(yīng)答中起著非常重要的作用。鼠類UL16結(jié)合蛋白樣轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物1(Murine ULBP like transcript1, MULT1)及其剪切變體MULT1S是小鼠NKG2D配體。MULT1是胞內(nèi)段較長的跨膜蛋白,與NKG2D呈高親和力結(jié)合。它在成年小鼠的細胞表面不表達或低表達,在病理條件下,如應(yīng)激細胞、細菌或病毒感染細胞表面有表達或表達上調(diào)。有文獻報道,MULT1可以通過與NKG2D結(jié)合促使表達NKG2D的NK細胞、NKT細胞等免疫細胞活化,促進它們對腫瘤細胞和病毒感染細胞的裂解,從而實現(xiàn)抗感染和抗腫瘤功能。但是,MULT1和MULT1S在體內(nèi)過表達會對機體產(chǎn)生什么影響?MULT1和MULT1S是否還具有其它功能,兩者在功能上有何區(qū)別等問題也有待解決。為此,我們實驗室構(gòu)建了Multl和Multls轉(zhuǎn)基因小鼠。本文第一部分工作是分析Mult1轉(zhuǎn)基因小鼠表型變化以及轉(zhuǎn)基因?qū)Ω腥久庖吆湍[瘤免疫的影響。 在這一部分,我們選取了6周齡～12月齡的Multl轉(zhuǎn)基因小鼠,對胸腺、脾臟和小腸進行表型分析。結(jié)果顯示,Multl轉(zhuǎn)基因小鼠的胸腺明顯小于同窩對照鼠,NKG2D+的NK細胞、NKT細胞、NKG2D+的γδT細胞略有升高；脾細胞表型分析結(jié)果顯示,NKG2D+的NK細胞、B細胞、NKT細胞和NKG2D+的γδT細胞的比例略有下降;轉(zhuǎn)基因小鼠的小腸上皮間γδT細胞表面的NKG2D表達水平降低。這提示我們轉(zhuǎn)基因小鼠對腸道疾病的抵抗能力可能減弱。為了驗證這一假說,我們選擇由硫酸葡聚糖鈉(Dextran sulfate sodium salt, DSS)誘導(dǎo)的結(jié)腸炎模型。與對照組相比,急性炎癥期的轉(zhuǎn)基因小鼠對DSS反應(yīng)更加敏感,體重迅速減輕,病程進展快；進入慢性期后,轉(zhuǎn)基因小鼠的病程與對照組小鼠相近,但炎癥結(jié)腸組織白細胞介素1α (Interleukin-1α, IL-1α)、IL-12/23(p40)和干擾素-γ (Interferon-γ, IFN-γ)的分泌水平顯著下調(diào)。 通過對Mult1-RMA腫瘤模型的研究發(fā)現(xiàn),與對照組小鼠相比,轉(zhuǎn)基因組小鼠的腫瘤生長速度加快,生存率顯著降低。提示體內(nèi)過表達MULT1降低機體對腫瘤的抵御能力。 與MULT1類似,UL-16結(jié)合蛋白(UL-16binding proteins, ULBPs)及MHC-I-類鏈(MHC-class I chain, MIC)分子是人的NKG2D配體,這些配體在正常細胞上不表達或呈低水平表達。據(jù)文獻報道,在一些應(yīng)激狀態(tài),如DNA損傷和氧化應(yīng)激情況下,部分ULBPs的表達有顯著升高。亞健康是受到環(huán)境、心理、生理等方面刺激后發(fā)生的相應(yīng)代償反應(yīng),即應(yīng)激反應(yīng)。但國內(nèi)關(guān)于亞健康的研究多偏重社會心理、環(huán)境和生活方式等因素的影響,醫(yī)學(xué)方面的數(shù)據(jù)較少。如果能針對ULBPs和MICA/B分子的表達水平和機體亞健康狀態(tài)之間的關(guān)系展開研究,找到亞健康與這些應(yīng)激分子表達量的關(guān)系,可望對難于評價的亞健康狀態(tài)提供一個客觀的指標和數(shù)據(jù)。所以,本文第二部分的研究旨在探究ULBPs及MIC分子在亞健康狀態(tài)診斷及評價中的作用。 在這一部分,我們采用了WHO公認的較為全面的心理功能衰退指數(shù)(mentality function decline index, MDI)健康評估法和體檢相結(jié)合的方法對招募的志愿者進行分類,然后檢測血清中ULBPs和MICA/B分子的含量,并分析其與受檢者健康狀態(tài)的關(guān)系。結(jié)果顯示,亞健康組的血清MICB含量明顯高于健康對照組(P0.01)。目前對亞健康的診斷缺乏比較客觀的生物學(xué)檢測指標,所以,MICB的表達水平的變化將有望成為一個新的臨床參考指標,有助于提高對亞健康狀態(tài)評價的準確性。此外,研究結(jié)果顯示男性組的MICA和ULBP3的表達顯著高于女性組(P0.05)而且隨著年齡的增長,ULBP2和ULBP4也會出現(xiàn)顯著性差異。提示,未來在用ULBPs或MICA/B等應(yīng)激分子作為臨床診斷指標時,其參考值的設(shè)立需要考慮年齡、性別等帶來的差異。 本研究主要得到以下結(jié)論：(1)Multl轉(zhuǎn)基因小鼠脾臟NK細胞、NKT細胞等免疫細胞的比例略有下降,胸腺的NKG2D+的NK細胞、NKT細胞和NKG2D+的γδT細胞比例略有升高,小腸上皮間γδT細胞表面的NKG2D受體表達量降低；(2)轉(zhuǎn)基因后小鼠對腸炎和腫瘤的抵抗力降低,但是兩種轉(zhuǎn)基因小鼠之間并無顯著差異；(3)血清MICs和ULBPs含量有望成為輔助亞健康診斷的一個新的生物學(xué)檢測指標。
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R392.1

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 李成紅;崔蓮仙;何維;馬馳;;氧化應(yīng)激可選擇性誘導(dǎo)細胞的NKG2D配體的表達[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2009年08期

2 李成紅;崔蓮仙;何維;馬馳;;氧化應(yīng)激對小鼠NKG2D配體表達的影響[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2010年06期

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本文編號：2576806