【摘要】：硒是人和動(dòng)物體必需的微量元素之一,具有多種重要生理功能。我國一些地區(qū)早先發(fā)生的克山病和大骨節(jié)病就是由于當(dāng)?shù)鼐用耖L期攝硒不足而導(dǎo)致的。硒的有益性和致毒性之間的濃度界限很窄,建立靈敏度高、準(zhǔn)確可靠的硒元素分析方法具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。硒在動(dòng)物體內(nèi)主要通過與蛋白結(jié)合的形式來發(fā)揮它的功能性,分析鑒定含硒的蛋白可以使我們更好地了解硒對(duì)人體健康的影響機(jī)理。 本文建立了微波消解-氫化物原子熒光光譜法(MD-HG-AFS)和微波消解-電感耦合等離子體質(zhì)譜法(MD-ICP-MS)兩種硒含量分析方法,并對(duì)其進(jìn)行了比較分析。兩種方法在各自定量限上均能獲得準(zhǔn)確可靠的分析結(jié)果。MD-HG-AFS法樣品處理相對(duì)繁瑣,工作效率低,但在在試驗(yàn)成本上占據(jù)一定優(yōu)勢(shì),利于普及推廣。MD-ICP-MS法所需儀器昂貴,但樣品制備簡(jiǎn)便快速,線性范圍寬,檢測(cè)靈敏度比前者高約20倍,分析速度快,適于大批量樣品的多元素高通量分析。 在硒元素的形態(tài)分析上,建立了在線分離測(cè)定硒代胱氨酸(Se-Cys)和硒代蛋氨酸(Se-Met)的液相色譜-電感耦合等離子質(zhì)譜法(LC-ICP-MS)和液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-ESI-MS-MS). LC-ICP-MS法中,Se-Cys和Se-Met在1-100μg/L均線性良好,兩者的檢出限分別為0.576μg/L和0.839μg/L,精密度試驗(yàn)中RSD值10%,該方法能夠滿足快速檢測(cè)Se-Cys和Se-Met含量的要求；LC-ESI-MS-MS法在優(yōu)化條件下Se-Cys(定量子離子為248.1)和Se-Met(定量子離子為181.1)在2-100μg/L均線性良好,檢出限分別為0.92μg/L和0.95μg/L。兩種方法都能夠應(yīng)用于硒元素的形態(tài)分析,但前者在實(shí)際樣品分析中基質(zhì)干擾小,適于定量分析,而后者的定性分析則更加可靠,還可用于鑒定未知的含硒化合物,兩種方法優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)。 水產(chǎn)品中含有豐富的硒,采用已建立的分析方法對(duì)23種水產(chǎn)品中的硒含量進(jìn)行了分析,最終以泥鰍為研究對(duì)象進(jìn)一步分析。采用順序提取法,依次對(duì)泥鰍肌肉中的水溶性蛋白、鹽溶性蛋白、醇溶性蛋白和堿溶性蛋白進(jìn)行了提取。結(jié)果未提到醇溶性蛋白,其它三者含量的相對(duì)百分比依次為堿溶性蛋白(63.27%)水溶性蛋白(24.44%)鹽溶性蛋白(12.29%)。粗蛋白的分離純化研究對(duì)比了兩種陰離子交換填料(DEAE-Sephacel和DEAE sepharose FF),最終選用DEAE-Sephacel對(duì)粗蛋白提取物進(jìn)行了初步分離純化。經(jīng)分離,從水溶性蛋白得到了W-1、W-2等六種蛋白組分；堿溶性蛋白分離得到了A-1、A-2等四個(gè)蛋白組分。采用SDS-PAGE分析,結(jié)果顯示提取得到的蛋白樣品分子量集中于4.1-66 kDa。由水溶性蛋白收集的六個(gè)組分中,W-5和W-6相對(duì)較純,分子量分別處于35 kDa和20 kDa附近。W-1和W-2、W-3和W-4的分離效果欠佳,分別含有共同的蛋白組分。 硒在不同蛋白組分中分布情況的研究表明,三種蛋白粗提物中均含有一定的硒含量,含硒量依次為水溶性蛋白(1.866μg/g)堿溶性蛋白(1.801μg/g)鹽溶性蛋白(1.607μg/g)；結(jié)合各蛋白粗提物的提取得率,可知蛋白硒占總硒的57.62%,可見硒在泥鰍肌肉中主要以與蛋白結(jié)合的形式存在,其中水溶性蛋白的W-4組分硒含量最高,為1.278μg/g。硒在泥鰍蛋白中的賦存形態(tài)研究中,對(duì)樣品的水解條件進(jìn)行了優(yōu)化,證實(shí)酶解處理蛋白樣品效果均好于鹽酸水解,幾種酶解方式中Ⅻ(胰蛋白酶+風(fēng)味蛋白酶)的酶解效果最好。將LC-ICP-MS法和LC-ESI-MS-MS法結(jié)合分析證實(shí),Se-Met是硒在所有蛋白樣品中的唯一賦存形態(tài)。 采用膠內(nèi)酶解處理、基質(zhì)輔助激光解吸飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜分析方式對(duì)硒含量相對(duì)較高的水溶性蛋白組分W-4進(jìn)行了分析鑒定。檢索結(jié)果表明,匹配度較高的三種蛋白均屬于肌肉組織中肌酸激酶。
【圖文】：

HN03一HZO:消解體系，用量分別為 4mL和 2mL。傳統(tǒng)的濕法消解常需要冷消化過夜，效率較低，，本法樣品采用密閉式微波消解，由消解罐的數(shù)量選擇相應(yīng)的功率，優(yōu)化了2.2.1梯度升溫程序下終溫的保持時(shí)間(圖2一l)，可知15一 30min內(nèi)各樣品測(cè)定值己基木保持穩(wěn)定，表明180℃下 15min樣品即可消解完全，且測(cè)定干擾小，結(jié)果重現(xiàn)性好。06r蝦蟹螺蛤龍魚魚子小魷花梭黑田

本文編號(hào)：2550234