【摘要】：目的：明確臨床分離的多重耐藥鮑曼不動桿菌耐藥基因的特點(diǎn)，并研究其對常用消毒劑的耐受機(jī)制。 方法： （1）收集2009-2011年菌株做菌種鑒定，藥敏試驗(yàn)。 （2）進(jìn)行碳青霉烯酶篩選試驗(yàn)。 （3）用OXA-23、qacE△1、tnpU、aac6、ISAab1、bla OXA58、blaCTX-M、TEM-Q、SHV-Q、NDM-1等引物基因?qū)Τ樘岬幕蚪MDNA進(jìn)行擴(kuò)增，檢測耐藥基因。 （4）用脈沖場凝膠電泳對采集自呼吸監(jiān)護(hù)病區(qū)的多重耐藥鮑曼不動桿菌進(jìn)行同源性分析。 （5）NDM-1耐藥基因連接PMD18-T載體。 （6）觀察消毒劑含氯消毒劑和醋酸氯已定對63株多重耐藥鮑曼不動桿菌（MDRAB）的殺滅效果。研究MDRAB耐消毒劑機(jī)制，研究MDRAB耐消毒劑基因的表達(dá)。 結(jié)果： （1）證實(shí)2009-2011年所收集的菌株為多重耐藥鮑曼不動桿菌，對常用7類抗假單鮑菌藥物青霉素類、頭孢菌素類、氨基糖甙類、碳青霉烯類、四環(huán)素類、喹諾酮類、磺胺類中的至少5類對應(yīng)的抗生素同時耐藥，耐藥率高達(dá)99%，表現(xiàn)為多重耐藥。 （2）碳青霉烯酶篩選試驗(yàn)顯示，耐藥菌株產(chǎn)碳青霉烯酶，陽性率為67.7%。 （3）耐藥基因檢測顯示耐藥菌株8種耐藥基因陽性。對aac6耐藥基因高度表達(dá)，，陽性率為93%；OXA23次之，陽性率為87.1%；qacE△1為81.2%；tnpU陽性率為78.3%；ISAab陽性率為64.9%；TEM陽性率為62.8%；SHV陽性率為21.1%；檢出一株NDM-1陽性菌株。 （4）3株分離自呼吸監(jiān)護(hù)病區(qū)的菌株經(jīng)PFGE確證相似度較高，同源性高達(dá)87%。 （5）成功構(gòu)建PMD18-T-NDM-1載體。 （6）63株MDRAB菌株中,檢測出耐消毒劑基因qacE△1-sul147株，陽性率為：74.6%。含氯消毒劑消毒濃度5000mg/L時，能殺滅所有試驗(yàn)菌株。當(dāng)醋酸氯已定濃度為4-8mg/L時，陰性菌株即可得到抑制殺滅，最低抑菌濃度與最低殺菌濃度相差不大。當(dāng)醋酸氯已定濃度大于16mg/L時對陽性菌株有抑制殺滅作用。 結(jié)論： （1）MDRAB耐藥機(jī)制已轉(zhuǎn)變?yōu)槎喾N耐藥基因共同介導(dǎo)的復(fù)雜機(jī)制。 （2）從呼吸監(jiān)護(hù)病區(qū)分離的菌株來自同一克隆株。 （3）含氯消毒劑都可殺滅耐藥菌株，醋酸氯已定的殺菌效果與qacE△1-sul1基因的攜帶密切相關(guān)。
【圖文】：

會產(chǎn)生朝向抑苗圈內(nèi)增強(qiáng)生長，呈矢狀。本次實(shí)驗(yàn)采集的 114 株耐亞胺培南鮑曼不動桿菌 Hodge 試驗(yàn)陽性株有 77 株，陽性率為 67.7%。結(jié)果見圖 1圖1 碳青霉烯酶表型實(shí)驗(yàn)結(jié)果，注：陽性對照質(zhì)控菌為肺炎克雷伯桿菌ATCC BAA 一 1705；陰性對照質(zhì)控菌為肺炎克雷伯桿菌 ATCC BAA 一 1706。2、引物 OXA-23、qacE△1、tnpU、aac6、ISAab1、bla OXA58、blaCTX-M、TEM-Q、SHV-Q、NDM-1 、VIM2、IMP1 擴(kuò)增結(jié)果（1）OXA-23 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物目的條帶分子量為 1058bp，結(jié)果顯示有 99 株檢出目的基因，陽性率 87.1%，部分菌株擴(kuò)增結(jié)果見圖 2。二、結(jié)果圖 2 OXA-23 PCR 部分?jǐn)U增產(chǎn)物圖，注：M，Marker（2000、1000、750、500、250、100）；編號 53～73：均為亞胺培南耐藥

圖1 碳青霉烯酶表型實(shí)驗(yàn)結(jié)果，注：陽性對照質(zhì)控菌為肺炎克雷伯桿菌ATCC BAA 一 1705；陰性對照質(zhì)控菌為肺炎克雷伯桿菌 ATCC BAA 一 1706。2、引物 OXA-23、qacE△1、tnpU、aac6、ISAab1、bla OXA58、blaCTX-M、TEM-QSHV-Q、NDM-1 、VIM2、IMP1 擴(kuò)增結(jié)果（1）OXA-23 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物目的條帶分子量為 1058bp，結(jié)果顯示有 99 株檢目的基因，陽性率 87.1%，部分菌株擴(kuò)增結(jié)果見圖 2。
【學(xué)位授予單位】：廣州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R3416

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 胡耀華;王紅梅;謝小武;;ICU多重耐藥鮑曼不動桿菌的耐藥性和同源性分析[J];中南醫(yī)學(xué)科學(xué)雜志;2011年03期

2 石巖;劉大為;許大波;徐英春;陳民均;王輝;;泛耐藥鮑曼不動桿菌感染臨床治療初探[J];中國感染與化療雜志;2007年01期

3 劉原;譚湘淑;韓新鵬;;西安地區(qū)耐亞胺培南鮑曼不動桿菌的碳青霉烯酶及同源性研究[J];中國感染與化療雜志;2009年01期

4 呂學(xué)詵;呂仁杰;呂超;;基因敲除與基因沉默[J];黑龍江醫(yī)藥科學(xué);2009年05期

5 閆中強(qiáng);沈定霞;羅燕萍;曹敬榮;;多重PCR方法檢測多耐藥鮑曼不動桿菌基因型[J];臨床檢驗(yàn)雜志;2008年06期

6 楊志偉;季萍;張堅(jiān);;多重耐藥鮑曼不動桿菌16S rRNA甲基化酶基因及qacE△1-sul1基因檢測的研究[J];臨床檢驗(yàn)雜志;2010年05期

7 李穎;楊帆;;澳大利亞出現(xiàn)產(chǎn)金屬β內(nèi)酰胺酶NDM-1的多重耐藥大腸埃希菌[J];中國感染與化療雜志;2011年02期

8 李貞銘,盧文添;鮑曼不動桿菌的耐藥機(jī)制[J];齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2003年10期

9 應(yīng)春妹;翁文浩;;鮑曼不動桿菌多重耐藥機(jī)制研究進(jìn)展[J];檢驗(yàn)醫(yī)學(xué);2007年02期

10 葉春枚;王敏;;鮑曼不動桿菌的耐藥分析及主動外排基因adeB的檢測[J];實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué);2010年05期

本文編號：2532320